C1QBP在腎癌發(fā)展進(jìn)程中的作用.pdf

1、目的：
　　腎癌在泌尿系統(tǒng)腫瘤中很常見(jiàn)，在我國(guó)有很高的發(fā)病率，是一種嚴(yán)重威脅人類(lèi)健康的疾病。而腫瘤的發(fā)展與腫瘤細(xì)胞的增殖、趨化、侵襲以及黏附能力均有重要關(guān)系。腎癌靶向治療尚有許多未知領(lǐng)域需要進(jìn)一步探索。因此，目前亟需進(jìn)一步探討腎癌的發(fā)展機(jī)制并探索新的生物靶點(diǎn)。以往的研究顯示 C1QBP在多種惡性腫瘤中的表達(dá)增多，同時(shí)也有報(bào)道顯示C1QBP在宮頸癌中低表達(dá)，說(shuō)明C1QBP在腫瘤中的表達(dá)及對(duì)腫瘤生物學(xué)行為的調(diào)節(jié)有組織特異性，但目前有關(guān)

2、C1QBP在腎癌中的研究尚未見(jiàn)報(bào)道。因此，本研究將檢測(cè)C1QBP在腎癌中的表達(dá)情況，探討C1QBP在腎癌發(fā)展中對(duì)腎癌細(xì)胞增殖、趨化、侵襲以及黏附能力的影響，初步明確C1QBP在腎癌發(fā)展中的作用。
　　方法：
　　采用Western Blotting、Realtime PCR、免疫組化的方法比較C1QBP在腎癌及癌旁組織中的表達(dá)水平；統(tǒng)計(jì)學(xué)分析C1QBP表達(dá)與臨床病理參數(shù)之間的相關(guān)性。應(yīng)用Realtime PCR的方法檢測(cè)C1

3、QBP在正常腎上皮細(xì)胞和腎癌細(xì)胞系中的表達(dá)水平。應(yīng)用慢病毒載體介導(dǎo)的RNA干擾技術(shù)構(gòu)建C1QBP穩(wěn)定降表達(dá)的人腎癌786-0細(xì)胞系，用Western Blotting和Realtime PCR的方法驗(yàn)證C1QBP表達(dá)水平。通過(guò)CCK8實(shí)驗(yàn)、趨化運(yùn)動(dòng)實(shí)驗(yàn)、Matrigel侵襲實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞黏附實(shí)驗(yàn)分別檢測(cè)C1QBP降表達(dá)對(duì)人腎癌786-0細(xì)胞系的增殖能力、EGF誘導(dǎo)的趨化運(yùn)動(dòng)能力、侵襲能力和EGF誘導(dǎo)的黏附能力的影響。通過(guò)基因芯片檢測(cè)，分析C

4、1QBP降表達(dá)對(duì)人腎癌786-0細(xì)胞系基因表達(dá)的影響，Realtime PCR驗(yàn)證差異基因表達(dá)。通過(guò)Western Blotting檢測(cè)分析C1QBP調(diào)控腎癌黏附功能的分子機(jī)制。SCID小鼠體內(nèi)實(shí)驗(yàn)研究C1QBP降表達(dá)對(duì)人腎癌786-0細(xì)胞系生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移的影響，并通過(guò)免疫組化檢測(cè)C1QBP降表達(dá)對(duì)增殖相關(guān)抗原PCNA表達(dá)水平的影響。
　　結(jié)果：
　　1.腎癌組織中C1QBP的RNA及蛋白表達(dá)量低于癌旁組織，且C1QBP表達(dá)與患

5、者臨床組織學(xué)分期和術(shù)后生存率顯著相關(guān)。
　　2. C1QBP在腎癌細(xì)胞中的表達(dá)低于腎上皮細(xì)胞，且隨著腎癌細(xì)胞惡性程度的增加C1QBP表達(dá)逐漸降低。
　　3.應(yīng)用慢病毒介導(dǎo)的RNA干擾技術(shù)成功建立C1QBP穩(wěn)定降表達(dá)的腎癌786-0細(xì)胞系，Western Blotting和Realtime PCR驗(yàn)證C1QBP蛋白和基因表達(dá)均明顯下降。
　　4. C1QBP降表達(dá)的腎癌786-0細(xì)胞系與對(duì)照組相比增殖能力、EGF誘導(dǎo)的趨

6、化運(yùn)動(dòng)能力、細(xì)胞侵襲能力和EGF誘導(dǎo)的黏附能力均明顯增強(qiáng)。
　　5.通過(guò)基因芯片分析，C1QBP敲除會(huì)影響細(xì)胞黏附相關(guān)基因的表達(dá)，通過(guò)Realtime PCR進(jìn)一步檢測(cè)了8個(gè)與黏附相關(guān)的基因，其中L1CAM在786-0-shC1QBP細(xì)胞中的表達(dá)顯著增加。
　　6. C1QBP敲除后腎癌細(xì)胞中β-catenin表達(dá)增高，GSK3蛋白磷酸化水平也增高。
　　7. C1QBP降表達(dá)促進(jìn)種植瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移，并且種植瘤中PCNA

7、表達(dá)明顯高于對(duì)照組。
　　結(jié)論：
　　1.與癌旁組織相比，C1QBP在腎癌組織標(biāo)本中表達(dá)較低，且與腫瘤病人的組織學(xué)分期和術(shù)后生存率相關(guān)，此外隨著腫瘤細(xì)胞惡性程度增高C1QBP表達(dá)水平降低。
　　2.通過(guò)降低C1QBP的表達(dá)，可以促進(jìn)腎癌細(xì)胞的增殖、趨化、侵襲能力。
　　3. C1QBP降表達(dá)可以增強(qiáng)腎癌細(xì)胞的黏附能力，可能是通過(guò)激活Wnt通路相關(guān)蛋白，上調(diào)LICAM發(fā)揮生物學(xué)作用。
　　4. C1QBP降表