新型喜樹堿類化合物ZH-001的抗腫瘤活性及其分子機制研究.pdf

1、研究目的：評價新型喜樹堿類化合物ZH-001的體內外抗腫瘤活性，并探究其作用機制。
　　研究方法：
　　1. ZH-001的體內外抗腫瘤活性評價：1）體外抑制腫瘤細胞增殖實驗中，采用四氮唑鹽還原法（MTT）或磺酰羅丹明 B蛋白染色法（SRB）來觀察ZH-001對20株人腫瘤細胞株的增殖抑制作用。2)采用人結腸癌Colo205、HCT-116、SW-620和人肺癌NCI-H460裸小鼠移植瘤模型，評價ZH-001體內抗腫瘤活性

2、。
　　2. ZH-001的抗腫瘤作用機制研究：1）瓊脂糖凝膠電泳法檢測ZH-001對Topoisomerase I活性的影響。2）流式細胞術結合PI單染，檢測ZH-001作用后，腫瘤細胞周期的變化情況。3）Western blotting法檢測ZH-001作用后細胞內周期、凋亡相關蛋白和γ-H2AX的表達情況。
　　研究結果：
　　1. ZH-001在體內外具有高效的抗腫瘤活性：1) ZH-001對20株不同組織來源

3、的人腫瘤細胞，均有明顯的增殖抑制作用，半數抑制濃度（IC50）為3.46-259.76 nM。陽性對照TPT和SN-38的IC50分別為11.34-1814.42 nM和6.05-1169.66 nM。2)在人結腸癌Colo205裸小鼠移植瘤模型中，ZH-0011.6 mg/kg組與陽性對照CPT-112.5 mg/kg組治療作用相似；在HCT-116和SW-620人結腸癌裸小鼠移植瘤模型中， ZH-001最低有效劑量為0.8 mg/k

4、g，小于陽性對照組；在NCI-H460人肺癌裸小鼠移植瘤模型中，ZH-001能劑量依賴性的抑制腫瘤生長，但效果不如陽性藥。
　　2. ZH-001通過抑制Topoisomerase I活性、誘導DNA的損傷從而導致細胞周期阻滯和凋亡，最終發(fā)揮抗腫瘤活性：1) ZH-001能夠抑制Topo I的活性，能減少DNA解旋，效果類似于SN-38，強于TPT。2）ZH-001能夠上調γ-H2AX的表達，誘導DNA損傷，作用與TPT和SN-3

5、8相當。3) ZH-001能夠誘導HCT-116發(fā)生G2/M期阻滯，且呈時間依賴性增加，其效應與SN-38相當，優(yōu)于TPT。ZH-001能下調周期相關蛋白CDK1和Cyclin B1水平。4) ZH-001能上調促凋亡蛋白Bax，下調抗凋亡蛋白Bcl-2，但促進pro-Caspase-3下調的作用不及陽性對照SN-38。
　　結論：ZH-001具有廣譜的體外抗腫瘤活性，體內抗腫瘤藥效優(yōu)于SN-38和TPT。ZH-001的抗腫瘤作用