胡楊基因組大片段轉(zhuǎn)化擬南芥及突變體生物性狀分析.pdf

1、隨著土壤鹽漬化已經(jīng)發(fā)展為世界性的環(huán)境問題，高耐鹽堿的胡楊作為一種十分珍貴的、擁有優(yōu)良抗逆基因和精細復(fù)雜的表達調(diào)控元件的種質(zhì)資源在抗逆研究中得到重視。本論文采用已構(gòu)建好的胡楊大片段可轉(zhuǎn)化BAC庫為載體，以擬南芥為受體植物，進行胡楊大片段DNA轉(zhuǎn)化、篩選及突變株系的鑒定研究，主要研究結(jié)果如下:
　　1.優(yōu)化了擬南芥培養(yǎng)、遺傳轉(zhuǎn)化及篩選程序。采用花粉管通道法將攜帶胡楊DNA大片段的農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化野生型擬南芥，對室內(nèi)培養(yǎng)方法和侵染技術(shù)進行優(yōu)化

2、，將擬南芥的轉(zhuǎn)化效率提高至45.57％。進行了擬南芥播種方式，侵染懸浮液的組分，篩選培養(yǎng)的選擇等對比試驗，確定了優(yōu)化培養(yǎng)和篩選程序為:將種子播種到壤中;用5％的蔗糖+20％SilwetL77為懸浮液;侵染量為每個菌號6～8株;侵染時間為5min，且不進行二次侵染;暗處理16～24h;篩選培養(yǎng)基為含有50mg·L-1 Kan的1/2MS（大量元素減半，其余成分不變）。
　　2.轉(zhuǎn)化了1210個攜帶胡楊的大片段的農(nóng)桿菌，共侵染了100

3、32株野生型擬南芥，并得到2249株陽性植株，獲得可觀察的6個突變表型:植株矮化變異型;葉片黃化變異型;快速生長變異型;幼苗抗性弱變異型;根系短長變異型;葉片邊緣呈鋸齒狀變異型。6個變異型共獲得119株植株。
　　3.對具有突變表型的所有株系進行電泳檢測，確定該株系已成功轉(zhuǎn)入大片段，并且正常生長并結(jié)種，T2代篩選時出現(xiàn)性狀分離比為3∶1。
　　4.對快速生長突變型生長檢測表明，從抽苔開始后十天的莖高增長量是野生型擬南芥的2倍