殼聚糖酶法降解工藝及其產(chǎn)物的抗氧化與抗腫瘤活性.pdf

1、殼寡糖(Chitooligosaccharide，COS)是殼聚糖的降解產(chǎn)物。大量研究表明，殼寡糖具有很好的抗氧化功能和抗腫瘤活性。本文以相對分子質(zhì)量為50wDa的殼聚糖粉末為原料，利用一定濃度的乙酸將其調(diào)配成不同濃度、不同pH值的殼聚糖溶液，然后根據(jù)不同的酶解條件下，在殼聚糖樣品溶液中加入殼聚糖酶發(fā)生酶解反應(yīng)，并研究該產(chǎn)物殼寡糖溶液的抗氧化活性和其對MKN45胃癌細胞存活率的影響。
　　本研究主要內(nèi)容包括：⑴在單因素試驗的基礎(chǔ)上

2、，采用響應(yīng)面分析法優(yōu)化殼聚糖酶法催化成殼寡糖的條件及其酶解產(chǎn)物對清除DPPH自由基的活性的影響。本文以不同酶與底物比，酶解時間，殼聚糖溶液pH值，酶解溫度和殼聚糖底物濃度這五個條件做為單因素，根據(jù)不同酶解條件下生成的殼寡糖清除DPPH自由基能力的單因素試驗結(jié)果：固定殼聚糖底物濃度為2g/100mL，選取不同酶底比、酶解時間、殼聚糖溶液pH值和酶解溫度做自變量，以酶解產(chǎn)物對DPPH自由基清除能力為響應(yīng)值，應(yīng)用Box-Behnken中心組合

3、法設(shè)計四因素三水平試驗。響應(yīng)面分析結(jié)果表明，四個因素對殼聚糖降解產(chǎn)物清除DPPH自由基的能力的影響大小為：殼聚糖溶液pH值＞酶解反應(yīng)溫度＞酶底比＞酶解反應(yīng)時間。通過二次回歸模型響應(yīng)面分析得出：酶解產(chǎn)物對DPPH自由基清除活性最佳優(yōu)化條件為酶解反應(yīng)時間64min，E/S為9:25，殼聚糖溶液pH4.6，反應(yīng)溫度54℃。殼聚糖酶解產(chǎn)物實際對DPPH自由基清除能力達92.60％，與模型理論值92.36%相比，誤差僅為0.26%。因此，試驗中通

4、過響應(yīng)面法優(yōu)化得到的酶解產(chǎn)物殼寡糖對清除DPPH自由基有很好的作用，值得進一步研究應(yīng)用。⑵將已經(jīng)調(diào)配好的不同底物濃度和pH值的殼聚糖溶液分別在不同單因素條件下發(fā)生酶解，生成的殼寡糖樣品進行冷凍干燥，并過濾除菌，用含有10％胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液調(diào)配成為一定濃度的藥品，分別作用于MKN45胃癌細胞和NCI1975肺癌細胞，在培養(yǎng)48h和72h后，用CCK8試劑盒檢測MKN45胃癌細胞的存活率。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，殼寡糖對MKN45胃癌細