維藥榅桲提取物對(duì)改善胰島素抵抗作用和機(jī)理的研究.pdf

1、目的：應(yīng)用榅桲提取物和3T3-L1前脂肪細(xì)胞株，探討3T3-L1脂肪細(xì)胞的增殖以及榅桲提取物對(duì)改善胰島素抵抗藥理作用和機(jī)制。
　　方法：將3T3-L1細(xì)胞分組后，對(duì)照組加正常培養(yǎng)液，模型組中加入不同濃度的榅桲提取物，分別在24,42,72h,96h時(shí)，使用MTT檢測(cè)細(xì)胞增殖情況；誘導(dǎo)分化后進(jìn)行葡萄糖消耗量測(cè)定且用油紅O染色和TG含量測(cè)定來鑒別誘導(dǎo)是否成功；對(duì)分化好的細(xì)胞進(jìn)行分組處理，加地塞米松誘導(dǎo)胰島素抵抗，取上清液，以培養(yǎng)基中的

2、葡萄糖消耗量反映胰島素抵抗程度，葡萄糖含量用葡萄糖檢測(cè)試劑盒測(cè)定；比較正常對(duì)照，模型組，陽(yáng)性藥物組，及榅桲提取物（低，中，高）組，使用葡萄糖測(cè)定試劑盒檢測(cè)培養(yǎng)基中葡萄糖的消耗量和FFA含量；使用PCR法檢測(cè)GLUT4和IRS的表達(dá)。
　　結(jié)果：與對(duì)照組比較，50μg/ml，200μg/ml，400μg/ml的生物堿和多糖能明顯抑制細(xì)胞增殖，濃度越高，抑制作用越明顯。榅桲總黃酮的抑制率與對(duì)照組相比較，作用并不明顯；經(jīng)過TG含量測(cè)定發(fā)

3、現(xiàn)，與對(duì)照組相比，成熟的3T3-L1細(xì)胞中脂質(zhì)含量增多，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。結(jié)合油紅O染色可以判定前脂肪細(xì)胞成功的誘導(dǎo)成成熟的脂肪細(xì)胞。通過葡萄糖試劑盒檢測(cè)發(fā)現(xiàn)模型組中的葡萄糖的利用率減少，尤其在48h中，可以鑒定胰島素抵抗模型成立。3T3-L1細(xì)胞中加入榅桲生物堿和榅桲多糖后，可以明顯改善3T3-L1細(xì)胞胰島素抵抗模型的葡萄糖利用率，與對(duì)照相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。與對(duì)照組相比，模型組細(xì)胞內(nèi)的游離脂肪酸

4、明顯高于正常對(duì)照組，表明形成胰島素抵抗模型的同時(shí)FFA水平也上升。羅格列酮組與模型組相比，其細(xì)胞內(nèi)的FFA水平明顯下降。同時(shí)，榅桲有效提取物生物堿和多糖均能夠有效抑制細(xì)胞內(nèi)游離脂肪酸的合成。誘導(dǎo)分化之后的3T3-L1細(xì)胞中的脂肪含量明顯提高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）羅格列酮和榅桲提取物生物堿和多糖能夠改善胰島素抵抗細(xì)胞內(nèi)Glut4和IRS-1基因表達(dá)。
　　結(jié)論：確定了最佳的細(xì)胞鋪板密度和榅桲3個(gè)提取物對(duì)3T3-L1脂肪