GANT61通過(guò)下調(diào)Gli1改善成年小鼠實(shí)驗(yàn)性心肌梗死后心肌纖維化的研究.pdf

1、背景：
　　Hedgehog（HH）通路是一條經(jīng)典的信號(hào)通路，在從低等動(dòng)物到高等動(dòng)物中普遍存在。正常表達(dá)的HH信號(hào)在人類(lèi)生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中發(fā)揮了關(guān)鍵作用，如參與諸如血管、神經(jīng)管、末梢組織等的形成。但持續(xù)異常激活的HH信號(hào)可導(dǎo)致不同類(lèi)型增殖性疾病的發(fā)生，包括各種腫瘤。此外，活化的HH信號(hào)也參與了組織的纖維化。而Gli1是HH信號(hào)通路中最重要的下游核轉(zhuǎn)錄因子，目前許多研究已經(jīng)證實(shí)Gli1在纖維化的形成和發(fā)展中扮演著重要的角色，但Gli1在

2、心血管系統(tǒng)疾病研究甚少，特別是在心肌梗死方面。因此通過(guò)檢測(cè)成年小鼠心肌梗死后Gli1在缺血心肌組織中的表達(dá)特點(diǎn)，來(lái)探討Gli小分子抑制劑GANT61減輕心肌梗死后心肌纖維化的分子機(jī)制意義重大。
　　第一部分、探討Gli1在心肌梗死后心肌組織的表達(dá)特點(diǎn)
　　目的：
　　通過(guò)建立小鼠心肌梗死動(dòng)物模型，探討Gli1在心肌梗死后心肌組織的表達(dá)特點(diǎn)。
　　方法：
　　在27只C57BL/6雄性小鼠中，運(yùn)用隨機(jī)數(shù)字法選

3、擇15只小鼠作為心肌梗死組（心梗組）建立心肌梗死模型，并分組為心梗組1周、心梗組2周、心梗組3周。在余下的12只小鼠中再次運(yùn)用隨機(jī)數(shù)字法選擇9只作為假手術(shù)組，分組為假手術(shù)組1周、假手術(shù)組2周、假手術(shù)組3周。最后的3只作為正常組。運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR和Western blot檢測(cè)心梗組1周、2周、3周梗死周?chē)鷧^(qū)缺血心肌組織Gli1 mRNA及蛋白的表達(dá)，并與正常組及假手術(shù)組相比較。運(yùn)用免疫熒光檢驗(yàn)心肌梗死和周邊區(qū)缺血心肌組織Gli1的表

4、達(dá)。
　　結(jié)果：
　　與心梗組2周相比較，心梗組3周Gli1 mRNA的表達(dá)量明顯升高（P＜0.05），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；假手術(shù)組與正常組心肌組織中Gli1 mRNA表達(dá)無(wú)明顯變化（P＞0.05），差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與心梗組2周相比，心肌梗死后第3周Gli1蛋白表達(dá)量明顯升高，其結(jié)果與qRT-PCR相似；免疫熒光結(jié)果提示：在正常組的心肌組織，Gli1不表達(dá)；在心肌梗死后2周的表達(dá)量少于心肌梗死后3周。
　　結(jié)論：

5、>　　Gli1在正常組、假手術(shù)組及心梗組1周不表達(dá)，而在心梗組2周Gli1存在激活的現(xiàn)象，并表現(xiàn)為隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，Gli1 mRNA及蛋白的表達(dá)量有逐漸升高的趨勢(shì)。
　　第二部分、探討GANT61改善成年小鼠實(shí)驗(yàn)性心肌梗死后心肌纖維化的分子機(jī)制
　　目的：
　　探討GANT61改善成年小鼠實(shí)驗(yàn)性心肌梗死后心肌纖維化的分子機(jī)制。
　　方法：
　　在80只C57BL/6雄性小鼠中，隨機(jī)取60只小鼠建立心肌梗死動(dòng)

6、物模型。心梗術(shù)后死亡18只。將存活的小鼠按照隨機(jī)數(shù)字表法分為心梗組、生理鹽水組、干預(yù)組。干預(yù)組于手術(shù)當(dāng)天起以50mg/kg/d的劑量皮下注射GANT61,生理鹽水組皮下注射與GANT61相等體積的生理鹽水。此外隨機(jī)取10只小鼠則作為假手術(shù)組，假手術(shù)組打開(kāi)胸腔后，縫線(xiàn)只穿過(guò)左前降支血管，不拉緊。剩下的10只小鼠則作為正常組。分別運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR和Western blot檢測(cè)心梗組1周、2周、3周，生理鹽水組1周、2周、3周及干預(yù)組1

7、周、2周、3周梗死和周?chē)鷧^(qū)缺血心肌組織Gli1、TGF-β1、Ⅰ型及Ⅲ型膠原mRNA及蛋白表達(dá)。并與正常組及假手術(shù)組相比較.運(yùn)用Masson染色觀(guān)察心臟梗死周邊區(qū)組織形態(tài)及心肌纖維化程度。
　　結(jié)果：
　　Masson染色顯示，心梗模型小鼠術(shù)后心肌纖維化程度隨著時(shí)間延長(zhǎng)而加重，GANT61干預(yù)后能減輕心肌纖維化；qRT-PCR和Western blot結(jié)果顯示，與心梗組3周相比較，GANT61干預(yù)3周后，可以明顯下調(diào)組織中G

8、li1 mRNA和蛋白的表達(dá)水平（P＜0.05），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與正常組相比，心梗后2周TGF-β1、Ⅰ型及Ⅲ型膠原mRNA及蛋白表達(dá)升高（P＜0.05），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與心梗組3周相比，經(jīng)過(guò)GANT61干預(yù)3周后TGF-β1、Ⅰ型及Ⅲ型膠原mRNA及蛋白表達(dá)均有下降（P＜0.05），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論：
　　GANT61可以通過(guò)抑制HH信號(hào)通路中Gli1的表達(dá)來(lái)減輕心肌纖維化。預(yù)測(cè)Gli1可能成為改善心肌