低溫脅迫下擬南芥肌動(dòng)蛋白解聚因子ADF5的功能研究.pdf

1、低溫是影響植物生長(zhǎng)發(fā)育的重要影響因子，是造成農(nóng)業(yè)減產(chǎn)危害、影響我國(guó)乃至全世界糧食安全的重要原因之一。因此，通過(guò)克隆抗凍基因、探討植物抗凍基因的分子機(jī)理、利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)提高植物的低溫耐受力具有重大的意義。
　　 本文的目的是研究擬南芥肌動(dòng)蛋白解聚因子ADF5在低溫脅迫下的功能。本實(shí)驗(yàn)克隆了該基因的全序列并連入載體1300-RFP，通過(guò)浸花法轉(zhuǎn)化入擬南芥FABD2使其在擬南芥體內(nèi)表達(dá)，用潮霉素進(jìn)行篩選；因其帶有RFP熒光定位，并用熒

2、光顯微鏡進(jìn)一步檢測(cè)確定是否轉(zhuǎn)入擬南芥FABD2。轉(zhuǎn)基因植株以1300-RFP載體作為對(duì)照，在低溫處理下，觀察植物的表型效應(yīng)，研究該基因在低溫脅迫處理時(shí)的表達(dá)模式，分析該基因可能的耐受機(jī)制，從而揭示低溫脅迫下擬南芥肌動(dòng)蛋白解聚因子ADF5的功能。
　　 本實(shí)驗(yàn)首先分離并克隆了擬南芥肌動(dòng)蛋白解聚因子ADF5、ADF5R、T10A、T10D。進(jìn)而通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化體系將植物表達(dá)載體1300-ADF5-RFP、1300-ADF5R

3、-RFP、1300-ADF5-T10A-RFP、1300-ADF5-T10D-RFP導(dǎo)入擬南芥植株FABD2，經(jīng)過(guò)潮霉素篩選，1300-ADF5-RFP、1300-ADF5R-RFP、1300-ADF5-T10A-RFP、1300-ADF5-T10D-RFP均得到T1代，1300-ADF5-T10A-RFP得到T3代并經(jīng)熒光檢測(cè)檢測(cè)證明已整合到擬南芥FABD2基因組中。
　　 實(shí)驗(yàn)證明，1300-ADF5-T10A-RFP對(duì)轉(zhuǎn)基

4、因擬南芥生長(zhǎng)發(fā)育有影響，初步推測(cè)1300-ADF5-T10A-RFP影響植物形態(tài)的建成，如以下結(jié)果。1300-ADF5-T10A-RFP T3代擬南芥形態(tài)觀察結(jié)果：轉(zhuǎn)基因T3代植株根毛稀少并且彎曲；而對(duì)照根毛密集和根毛直。統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，1300-ADF5-T10A-RFP T3代平均開(kāi)花時(shí)間比擬南芥1300-RFP載體對(duì)照開(kāi)花時(shí)間延遲了7-8天。1300-ADF5-T10A-RFP T3花粉管與野生型比較，1300-ADF5-T10A-