口腔鱗狀細(xì)胞癌中PRSS8及PTPN22的表達(dá)情況及甲基化狀態(tài)的研究.pdf

1、目的：口腔鱗狀細(xì)胞癌（oral squamous cell carcinoma, OSCC）是世界范圍內(nèi)最常見的口腔頜面部惡性腫瘤之一。近年來大樣本的流行病學(xué)研究表明，在中國(guó)，OSCC發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)，且發(fā)病年齡日趨年輕化，發(fā)病率在3.6/10-8.0/10萬之間。因其具有惡性程度高，易發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，預(yù)后差等特點(diǎn)，導(dǎo)致OSCC的5年生存率在50％左右。目前對(duì)于OSCC早期診斷及預(yù)后的研究較缺乏，當(dāng)前的研究認(rèn)為在OSCC發(fā)生發(fā)展中的

2、基因變化因素主要包括基因突變與表觀遺傳修飾異常。DNA甲基化的研究可以使我們更好的了解OSCC發(fā)生機(jī)制，為OSCC的早期診斷及預(yù)后提供新的理論基礎(chǔ)。
　　現(xiàn)階段研究表明，基因突變與表觀遺傳修飾異常是影響 OSCC發(fā)生的重要因素，表觀遺傳修飾是一種可遺傳、可逆轉(zhuǎn)的生物學(xué)行為，主要包括DNA核苷酸胞嘧啶的甲基化修飾、組蛋白修飾、非編碼RNA調(diào)控等。其中，DNA甲基化的研究成為表觀遺傳學(xué)的研究熱點(diǎn)。PRSS8基因又稱為人類的前列腺蛋白（

3、Prostasin）或CAP-1，位于染色體16p11.2上，不僅能維持機(jī)體的正常生理功能，而且參與生長(zhǎng)因子的調(diào)節(jié)、細(xì)胞的遷移多種炎癥、表皮生長(zhǎng)、腫瘤的發(fā)生等過程。近年來研究發(fā)現(xiàn)食管鱗癌、結(jié)直腸癌等癌組織中存在PRSS8基因甲基化狀態(tài)及PRSS8mRNA表達(dá)異常， PRSS8基因的異常改變有可能參與了癌癥的發(fā)生。蛋白酪氨酸磷酸酶非受體型22（PTPN22）基因位于染色體1p13.3-13.1上并參與上皮粘附。TCGA數(shù)據(jù)庫顯示PTPN2

4、2甲基化水平在腫瘤組織與正常組織之間有顯著差異。然而，盡管PTPN22基因在癌癥發(fā)生中有潛在重要性，但是關(guān)于它與腫瘤的報(bào)道很少。目前尚未發(fā)現(xiàn)PRSS8及PTPN22在OSCC中的表觀遺傳學(xué)變化相關(guān)報(bào)道。
　　本研究以52例OSCC術(shù)后標(biāo)本（河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院口腔科）為研究對(duì)象，通過分析OSCC組織和相應(yīng)正常黏膜組織中PRSS8及PTPN22基因的啟動(dòng)子區(qū)甲基化狀態(tài)及其mRNA的表達(dá)水平，并結(jié)合患者的臨床病理特征進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，旨在

5、揭示OSCC的發(fā)病機(jī)制，為OSCC的早期發(fā)現(xiàn)與預(yù)后的評(píng)估提供實(shí)驗(yàn)理論依據(jù)。
　　方法：
　　1.應(yīng)用甲基化特異性聚合酶鏈反應(yīng)(Methylation Specific PCR，MSP)檢測(cè)52例經(jīng)術(shù)后病理診斷為 OSCC的癌組織及相應(yīng)正常黏膜組織中PRSS8及PTPN22基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化狀態(tài)。
　　2.應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(Reverse Transcriptase-PCR，RT-PCR)技術(shù)檢測(cè)52例術(shù)后經(jīng)病理

6、診斷為OSCC的標(biāo)本的癌組織及相應(yīng)正常黏膜組織中PRSS8及PTPN22的mRNA相對(duì)表達(dá)量。
　　3.應(yīng)用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS21.0對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　結(jié)果：
　　1.OSCC和正常組織中PRSS8及PTPN22基因的甲基化狀態(tài)
　　52例 OSCC組織中 PRSS8及 PTPN22基因啟動(dòng)子甲基化率分別為57.7％（30/52），51.9％（27/52），52例正常組織甲基化率為34.6％（18/5

7、2），30.8％（16/52），經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，OSCC組織PRSS8及PTPN22基因啟動(dòng)子甲基化率均明顯高于相應(yīng)正常組織，其差異都具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=5.571,P=0.018；χ2=4.798,P=0.029）。（Table1,2）(Fig.1,2)
　　2.OSCC和正常組織中PRSS8及PTPN22基因mRNA的表達(dá)情況
　　52例標(biāo)本中OSCC組織和正常組織PRSS8mRNA的表達(dá)量均符合正態(tài)分析，PRSS8mR

8、NA的相對(duì)表達(dá)量為0.44±0.12，相應(yīng)正常組織的表達(dá)量為0.71±0.13，采用配對(duì)t檢驗(yàn)，PRSS8基因mRNA的相對(duì)表達(dá)量在OSCC組織中明顯低于相應(yīng)正常組織，其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=-10.620, P=0.000）。（Table3）(Fig.3)
　　PTPN22 mRNA的相對(duì)表達(dá)量為0.44±0.20，相應(yīng)正常組織的表達(dá)量為0.63±0.20，PTPN22基因 mRNA的相對(duì)表達(dá)量在OSCC組織中明顯低于相應(yīng)正常

9、組織，其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=-4.647, P=0.000）。（Table4）(Fig.4)
　　3.PRSS8及PTPN22基因甲基化組與非甲基化組中mRNA相對(duì)表達(dá)量的比較
　　在52例 OSCC組織中，甲基化組 PRSS8mRNA的相對(duì)表達(dá)量為0.43±0.12，非甲基化組為0.52±0.11，利用獨(dú)立樣本 t檢驗(yàn)進(jìn)行分析，結(jié)果顯示甲基化組與非甲基化組 PRSS8mRNA相對(duì)表達(dá)量之間的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=-2

10、.880, P=0.006）。（Table5）
　　PTPN22mRNA在甲基化組相對(duì)表達(dá)量為0.47±0.18，在非甲基化組相對(duì)表達(dá)量為0.56±0.08，甲基化組與非甲基化組中 PTPN22mRNA相對(duì)表達(dá)量之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=-2.171, P=0.035）。（Table6）
　　4.PRSS8和PTPN22基因啟動(dòng)子甲基化率與患者臨床參數(shù)之間的關(guān)系男性組PRSS8和PTPN22基因啟動(dòng)子甲基化率分別為53.3

11、％（16/30），46.7％（14/30），女性組甲基化率分別為63.6％（14/22），59.1％（13/22），其差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=0.552，P=0.458），（χ2=0.785，P=0.376）；年齡≥60歲組甲基化率分別為62.5％（20/32），56.3％（18/32），年齡<60歲組患者甲基化率分別為50.0％（10/20），45.0％（9/20），其差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=0.788, P=0.375），（χ2

12、=0.624, P=0.430）；飲酒組甲基化率分別為59.3％（16/27），51.9％（14/27），不飲酒組甲基化率分別為56.0％（14/25），52.0％（13/25），其差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=0.056, P=0.812）；（χ2=0.000, P=0.991）；吸煙組甲基化率分別為51.7％（15/29），48.3％（14/29），不吸煙組甲基化率分別為65.2％（15/23），56.5％（13/23），其差異均無統(tǒng)計(jì)

13、學(xué)意義（χ2=0.957, P=0.328），（χ2=0.349, P=0.554）；臨床Ⅰ期+Ⅱ期組甲基化率分別為38.1％（8/21），28.6％（6/21），臨床Ⅲ期+Ⅳ期組甲基化率分別為71.0％（22/31），67.7％（21/31），其差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=5.543, P=0.019），（χ2=66.589, P=0.000）；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組甲基化率分別為73.9%（17/23），65.2%（13/23），無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組

14、甲基化率分別為44.8%（13/29），41.4%（12/29），差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=4.446, P=0.035），（χ2=2.920, P=0.047）。高中分化組甲基化率分別為47.1%（16/34），41.2%（14/34），低分化組甲基化率分別為77.8%（14/18），72.2%（13/18），差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=4.550, P=0.033），（χ2=4.544, P=0.033）。（Table7,8）

15、>　　5.OSCC中PRSS8和PTPN22基因mRNA相對(duì)表達(dá)水平及與臨床參數(shù)之間的關(guān)系
　　男性組患者PRSS8和PTPN22mRNA的相對(duì)表達(dá)量分別為0.44±0.13，0.41±0.19，女性組的相對(duì)表達(dá)量分別為0.46±0.11，0.49±0.21，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=-0.586, P=0.560），（t=-1.481, P=0.145）；年齡≥60歲組的相對(duì)表達(dá)量分別為0.45±0.13，0.44±0.20，年齡

16、<60歲組相對(duì)表達(dá)量分別為0.43±0.10，0.46±0.20，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=-0.481, P=0.633），（t=-0.451, P=0.654）；飲酒組的相對(duì)表達(dá)量分別為0.43±0.11，0.47±0.22，不飲酒組的相對(duì)表達(dá)量分別為0.47±0.13，0.42±0.17，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=-1.197, P=0.237），（t=1.016, P=0.315）；吸煙組相對(duì)表達(dá)量分別為0.44±0.11，0.48

17、±0.22，不吸煙組相對(duì)表達(dá)量分別為0.45±0.13，0.40±0.18，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=-475, P=0.637），（t=1.323, P=0.192）；根據(jù)TNM分期，進(jìn)行臨床分期，其中Ⅰ+Ⅱ期相對(duì)表達(dá)量分別為0.49±0.11，0.56±0.12，Ⅲ+Ⅳ期分別為0.41±0.12，0.46±0.20，均具有顯著差異，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=2.335, P=0.024），（t=2.076, P=0.043）。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組

18、分別為0.42±0.11，0.44±0.17，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組分別為0.49±0.13，0.55±0.11，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=-2.119, P=0.039），（t=-2.688, P=0.010）。高中分化組相對(duì)表達(dá)量分別為0.48±0.12，0.57±0.11，低分化組相對(duì)表達(dá)量分別為0.39±0.11，0.49±0.12，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=2.736, P=0.009），（t=2.188, P=0.033）。（Table9,1

19、0）
　　結(jié)論：
　　1.PRSS8和PTPN22基因在OSCC組織中的mRNA相對(duì)表達(dá)量明顯低于其相應(yīng)的正常黏膜組織，提示PRSS8和PTPN22基因在OSCC中可能主要起抑癌基因的作用。
　　2.OSCC組織中PRSS8和PTPN22基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化率明顯高于其相應(yīng)的正常黏膜組織，提示PRSS8和PTPN22基因甲基化可能是OSCC發(fā)生的機(jī)制之一。
　　3.PRSS8和PTPN22啟動(dòng)子區(qū)甲基化率與患者性別