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文檔簡介
1、目的
肝癌、肝移植等肝臟外科手術(shù)往往面臨肝臟缺血再灌注損傷的難題,明顯增加了肝臟外科手術(shù)的難度和風(fēng)險。本實驗在建立大鼠肝臟缺血再灌注模型的基礎(chǔ)上,術(shù)前予黃芪甲苷預(yù)處理。通過對術(shù)后4h、8h、16h血清轉(zhuǎn)氨酶、炎性相關(guān)因子的檢測及肝組織顯微結(jié)構(gòu)的觀察,判斷黃芪甲苷預(yù)處理對大鼠肝臟缺血再灌注損傷是否具有保護(hù)作用。用Western Blot及免疫組化染色分析各組大鼠肝組織中自噬相關(guān)蛋白Beclin-1的表達(dá);電鏡下觀察各組大鼠肝臟細(xì)
2、胞內(nèi)自噬小體數(shù)量的變化。探討缺血再灌注后大鼠肝臟自噬水平的變化,以及黃芪甲苷預(yù)處理對大鼠肝臟缺血再灌注損傷可能存在的作用機(jī)制,為減輕患者肝臟缺血再灌注損傷提供潛在的理論依據(jù)。
方法
實驗分組:90只純系SD大鼠,隨機(jī)分為假手術(shù)組(Sham組),肝臟缺血再灌注組(HIRI組)、黃芪甲苷組(干預(yù)組),每組30只。再按術(shù)后4h、8h、16h三個時間段,每個時間段各10只。Sham組大鼠行腹腔注射麻醉后,腹部正中縱形切口,分
3、離肝蒂,不建立肝臟缺血再灌注模型。HIRI組和干預(yù)組大鼠麻醉后,建立肝臟缺血再灌注模型。干預(yù)組大鼠術(shù)前予黃芪甲苷溶液腹腔注射,1次/天,連續(xù)7天。
觀察指標(biāo):各組大鼠分別在術(shù)后4h、8h、16h采取血液和肝臟組織標(biāo)本。用全自動生化分析儀檢測各組大鼠血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)水平;用ELISA法測定大鼠血清炎性相關(guān)因子TNF-α,IL-6水平;使用蘇木精-尹紅(HE)染色后,觀察各組肝臟組織病理學(xué)變化;We
4、stern Blot及免疫組化染色分析肝組織中自噬相關(guān)蛋白Beclin-1的表達(dá);電鏡下觀察肝臟細(xì)胞內(nèi)自噬小體數(shù)量的變化。
結(jié)果
1.血清中轉(zhuǎn)氨酶水平的變化:同Sham組大鼠比較,HIRI組大鼠血清中ALT和AST水平在術(shù)后4h、8h、16h均明顯升高(P<0.05),于再灌注后8h時達(dá)到頂峰。與HIRI組大鼠比較,干預(yù)組大鼠血清ALT和AST水平在術(shù)后4h、8h、16h均明顯降低(P<0.05)。
2.血
5、清中炎性相關(guān)因子水平的變化:同Sham組大鼠比較,HIRI組大鼠血清中TNF-α,IL-6水平在術(shù)后4h、8h、16h均明顯升高(P<0.05),于再灌注后8h達(dá)到頂峰。與HIRI組大鼠比較,干預(yù)組大鼠血清TNF-α,IL-6水平在術(shù)后4h、8h、16h均明顯降低(P<0.05)。
3.肝組織HE染色后觀察:Sham組大鼠肝細(xì)胞索排列整齊、肝小葉結(jié)構(gòu)清晰、中央靜脈區(qū)無淤血、無炎性細(xì)胞浸潤。HIRI組大鼠在再灌注后4h、8h、1
6、6h,出現(xiàn)了不同程度的肝細(xì)胞索排列紊亂、中央靜脈區(qū)淤血、肝小葉結(jié)構(gòu)模糊、炎性細(xì)胞浸潤和肝細(xì)胞的水腫、壞死,其中以再灌注后8h的損傷最為嚴(yán)重。與HIRI組大鼠相比,干預(yù)組大鼠的肝臟組織病理變化在術(shù)后4h、8h、16h均有明顯改善。
4.肝組織自噬相關(guān)蛋白Beclin-1表達(dá)水平的變化:同Sham組大鼠比較,HIRI組大鼠Beclin-1蛋白的灰度比在術(shù)后4h、8h、16h均明顯升高(P<0.05),于再灌注后8h達(dá)到頂峰。與HI
7、RI組大鼠比較,干預(yù)組大鼠Beclin-1蛋白的灰度比在術(shù)后4h、8h、16h均明顯降低(P<0.05)。
5.免疫組化染色分析肝組織中Beclin-1的表達(dá):與Sham組大鼠相比,HIRI組大鼠肝臟組織Beclin-1的平均標(biāo)記指數(shù)(LI)在術(shù)后8h明顯升高(P<0.05)。與HIRI組大鼠相比,干預(yù)組大鼠肝臟組織Beclin-1平均LI在術(shù)后8h明顯降低(P<0.05)。
6.肝臟細(xì)胞自噬小體數(shù)量的變化:與Sha
8、m組大鼠比較,HIRI組大鼠肝臟細(xì)胞的自噬小體數(shù)量在術(shù)后8h明顯上升(P<0.05);與HIRI組大鼠比較,干預(yù)組大鼠肝臟細(xì)胞的自噬小體在術(shù)后8h明顯減少(P<0.05)。
結(jié)論
本實驗結(jié)果提示黃芪甲苷預(yù)處理可以降低大鼠肝臟缺血再灌注后轉(zhuǎn)氨酶水平并減輕炎癥反應(yīng),同時肝組織HE染色觀察結(jié)果也顯示黃芪甲苷預(yù)處理能明顯減輕大鼠肝臟的病理損傷程度,由此推斷黃芪甲苷預(yù)處理能夠減輕大鼠肝臟缺血再灌注損傷。本研究還發(fā)現(xiàn)缺血再灌注后
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