天然香豆素及蒽醌類成分對(duì)褪黑素代謝的抑制作用及應(yīng)用計(jì)算機(jī)模型預(yù)測風(fēng)險(xiǎn).pdf

1、目的：評(píng)價(jià)66種常見中草藥對(duì)褪黑素代謝的抑制作用，明確中藥對(duì)人體內(nèi)源性物質(zhì)代謝的影響；系統(tǒng)研究中藥白芷及大黃對(duì)褪黑素代謝的抑制作用，明確其發(fā)揮作用的主要活性成分并進(jìn)一步通過抑制動(dòng)力學(xué)等手段明確其作用機(jī)制，進(jìn)而預(yù)測臨床可能存在的藥物-藥物相互作用；最后在人的原代肝細(xì)胞中進(jìn)行藥物藥物相互作用驗(yàn)證；詳細(xì)測定47種香豆素類化合物對(duì)褪黑素的代謝抑制IC50值，同時(shí)構(gòu)建香豆素類成分結(jié)構(gòu)與其對(duì)褪黑素代謝抑制活性之間的定量構(gòu)效關(guān)系(3D-QSAR)，為

2、香豆素類藥物的臨床合理應(yīng)用提供寶貴的指導(dǎo)意見。
　　方法：（1）體外試驗(yàn)：利用體外孵育體系，評(píng)價(jià)66種中藥提取物對(duì)褪黑素 CYP代謝的抑制作用；在活性指引條件下利用植物化學(xué)和相關(guān)手段明確中藥白芷及大黃中對(duì)褪黑素代謝抑制的主要活性成分并鑒定；并評(píng)價(jià)其在CYP和SULT單酶中的抑制活性。(2)系統(tǒng)分析白芷中主要香豆素類化合物及大黃蒽醌類成分對(duì)褪黑素代謝的抑制動(dòng)力學(xué)，求算其抑制動(dòng)力學(xué)參數(shù)，結(jié)合藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)通過相關(guān)公式推測其可能存在的藥

3、物-藥物相互作用；同時(shí)在人的原代肝細(xì)胞中評(píng)價(jià)大黃蒽醌類成分和褪黑素藥物的相互作用。（3）精確測定47種香豆素類成分對(duì)褪黑素代謝的抑制 IC50值，利用精確 IC50和化合物的結(jié)構(gòu)通過比較分子場分析法和比較分子相似性分析方法構(gòu)建模型，確定其結(jié)構(gòu)與活性的定量構(gòu)效關(guān)系（3D-QSAR）；并利用分子對(duì)接研究大黃蒽醌類成分與CYP1A2和SULT1A1酶的立體空間結(jié)合位點(diǎn)進(jìn)一步解釋其抑制機(jī)理。
　　結(jié)果：在本實(shí)驗(yàn)工作中，首次篩選了66種常見

4、中草藥對(duì)褪黑素體外代謝的抑制作用，發(fā)現(xiàn)其中白芷和大黃表現(xiàn)出了最強(qiáng)烈的抑制作用。通過活性指引的植物化學(xué)分離方法確定了白芷、蛇床子、補(bǔ)骨脂等中藥主要發(fā)揮抑制作用的為香豆素成分，主要包括歐前胡素，異歐前胡素，珊瑚菜素，5-甲氧補(bǔ)骨脂素和8-甲氧補(bǔ)骨脂素，抑制動(dòng)力學(xué)分析表明它們對(duì)褪黑素CYP代謝抑制形式為混合抑制動(dòng)力學(xué)，其抑制Ki值分別為14.5 nM，38.8 nM，6.34 nM，5.34 nM和18 nM。同樣方法確定了大黃中的大黃蒽醌類

5、成分，包括蘆薈大黃素、大黃酚、大黃酸、大黃素和大黃素甲醚為大黃抑制活性的關(guān)鍵作用物質(zhì)，抑制形式為混合抑制動(dòng)力學(xué)，它們對(duì)褪黑素CYP代謝的抑制Ki值分別為0.16μM，0.14μM，0.42μM，0.24μM，和1.0μM。另外，蘆薈大黃素、大黃酚、大黃素對(duì)褪黑素二相磺酸化代謝也表現(xiàn)出了較好的混合性抑制作用，其Ki值分別為0.20μM，1.6μM和0.12μM。最后選取了大黃蒽醌類成分進(jìn)行體外抑制作用的研究，我們?cè)谌说脑渭?xì)胞中進(jìn)行 D

6、DI的研究，結(jié)果表明大黃粗提物能夠抑制褪黑素的代謝清除過程，表現(xiàn)出較強(qiáng)的藥藥相互作用。為了更進(jìn)一步的研究香豆素類成分結(jié)構(gòu)與褪黑素代謝抑制活性之間的定量構(gòu)效關(guān)系，我們精確測定了47種香豆素類化合物對(duì)褪黑素CYP代謝的抑制IC50值，并建立了CoMFA和CoMSIA預(yù)測模型。
　　結(jié)論:1)體外中藥篩選結(jié)果提示富含香豆素和蒽醌類化合物的中藥均有可能對(duì)褪黑素的代謝清除起到一定的抑制作用；2)香豆素類化合物和大黃蒽醌類化合物主要通過與關(guān)鍵