絲氨酸蛋白酶RHBDD1通過調(diào)控p-Akt和CDK2促進(jìn)乳腺癌生長(zhǎng).pdf

1、Rhomboid蛋白酶與癌癥的發(fā)生和預(yù)后有密切關(guān)系。RHBDD1是本研究組在生精細(xì)胞基因表達(dá)差異研究中發(fā)現(xiàn)的一個(gè)Rhomboid家族新成員，在睪丸中高水平表達(dá)，它能切割Bcl-2家族促凋亡分子BIK，進(jìn)而調(diào)控BIK介導(dǎo)的凋亡過程。RHBDD1參與調(diào)控結(jié)直腸癌細(xì)胞的生長(zhǎng)和凋亡。
　　做為惡性癌癥之一，乳腺癌具有異質(zhì)性和致死率高的特征，而且目前尚沒有針對(duì)乳腺癌抗藥性的有效分子標(biāo)記物。因此對(duì)RHBDD1在乳腺癌中如何發(fā)揮生物學(xué)功能調(diào)控乳

2、腺癌細(xì)胞惡性表型及其分子機(jī)制進(jìn)行深入研究。
　　利用組織微陣列聯(lián)合免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)了116例乳腺癌組織和39例對(duì)應(yīng)臨近癌旁組織內(nèi)RHBDD1的表達(dá)情況;還檢測(cè)了84例乳腺癌組織內(nèi)RHBDD1、p-Akt和CDK2的表達(dá)情況。選取了三陰性乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231和ER陽性乳腺癌細(xì)胞MCF7，使用CRISPR/Cas9基因改造系統(tǒng)，將乳腺癌細(xì)胞的RHBDD1敲除，在體外水平觀察RHBDD1對(duì)乳腺癌細(xì)胞惡性表型的影響。體外實(shí)驗(yàn)

3、包括:生長(zhǎng)曲線、集落形成、遷移和侵襲實(shí)驗(yàn)、劃痕實(shí)驗(yàn);還用熒光顯微技術(shù)結(jié)合TUNEL實(shí)驗(yàn)、流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期分布。使用RNA測(cè)序和蛋白質(zhì)免疫印記技術(shù)檢測(cè)RHBDD1在乳腺癌細(xì)胞內(nèi)發(fā)揮功能的分子機(jī)制。在動(dòng)物體內(nèi)水平實(shí)驗(yàn)中，將野生型和RHBDD1敲除型的MDA-MB-231細(xì)胞注射到裸鼠皮下，定期測(cè)量皮下瘤的生長(zhǎng)情況。
　　RHBDD1在乳腺癌組織中的表達(dá)量顯著高于癌旁組織(p=1.566e-12);將免疫組織化學(xué)評(píng)分大

4、于、等于5定為RHBDD1高表達(dá)，大于0、小于5定為RHBDD1低表達(dá)。在116個(gè)樣品中，有94/116的乳腺癌是RHBDD1高表達(dá)，所占比例為81％;只有11/39的癌旁組織是RHBDD1高表達(dá)，所占比例為28％。RHBDD1的高表達(dá)與病理學(xué)TNM分期(p=0.01474)和ER表達(dá)量(p=0.04679)相關(guān)。
　　體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，RHBDD1敲除能夠促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞凋亡，抑制乳腺癌細(xì)胞增殖、遷移和侵襲。RHBDD1敲除導(dǎo)致p

5、-Akt和CDK2的表達(dá)量均顯著下降，細(xì)胞周期進(jìn)程和G1/S期轉(zhuǎn)變受到抑制。動(dòng)物體內(nèi)水平實(shí)驗(yàn)證明，RHBDD1缺失能夠抑制裸鼠皮下腫瘤的生長(zhǎng)。
　　用Spearman相關(guān)性配對(duì)檢驗(yàn)分析了84例乳腺癌組織內(nèi)RHBDD1、p-Akt和CDK2的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)RHBDD1和p-Akt的表達(dá)顯著正相關(guān)(ρ=0.437; p=3.245e-05)，RHBDD1和CDK2的表達(dá)顯著正相關(guān)(ρ=0.386; p=0.0003)。
　　綜上所述