硫辛酸藥理作用機制及增加順鉑藥物敏感性的研究.pdf

1、硫辛酸（α-lipoic acid，LA）是一種擁有兩個功能基團的小分子天然化合物，是多種參與新陳代謝的關鍵酶的輔助因子，在人體內(nèi)的分布包括兩種形式：氧化形態(tài)的α-硫辛酸以及還原形態(tài)的二氫硫辛酸。硫辛酸是已知天然的效果最強的抗氧化劑，化學名稱為1,2-二硫戊環(huán)-3-戊酸，在體內(nèi)的肝臟和腎臟含量分布最高。硫辛酸是兼具水溶性及脂溶性的兩性分子，無論是氧化型還是還原型在水、脂環(huán)境中均能發(fā)揮很強的抗氧化作用，同時它也具有促氧化功能，可以清除自由

2、基和活性氧，鰲合金屬離子，再生谷胱甘肽以及維生素C/E等抗氧化劑，它還可以改善糖代謝，對糖尿病性白內(nèi)障、糖尿病引起的多發(fā)性神經(jīng)病以及心血管損傷具有較好的預防和治療作用。由于其強大的抗炎、抗氧化功能，近年來越來越多的研究證實其具有抗動脈粥樣硬化及抗腫瘤的功效。
　　動脈粥樣硬化（atherosclerosis，AS）是一種以脂質(zhì)及膽固醇不斷在動脈壁聚集沉積為特征的慢性炎癥疾病，是世界范圍內(nèi)心血管系統(tǒng)疾病主要的致死原因。尤其針對絕經(jīng)后

3、女性這一特殊群體，由于失去了雌激素抗炎、抗氧化、抗內(nèi)皮細胞凋亡、降低血脂、膽固醇、增加蛋白質(zhì)合成等等的保護作用，絕經(jīng)后女性動脈粥樣硬化（postmenopausal atherosclerosis）的治療顯得尤為棘手。近年來的研究發(fā)現(xiàn)，雌激素替代療法（hormone replacement therapy，HRT）治療絕經(jīng)后動脈粥樣硬化雖然能夠在短期內(nèi)取得明顯的臨床癥狀緩解，但在長期隨訪中發(fā)現(xiàn)其并不能明顯改善預后，且HRT增加了患者罹患

4、婦科腫瘤的風險。而硫辛酸作為天然抗氧化劑，可以通過清除體內(nèi)過量的活性氧（reactive oxygen species，ROS） 從而提高雌激素受體（estrogen receptors，ERs）的表達，促進雌激素發(fā)揮抗動脈粥樣硬化的功能，進而對絕經(jīng)后動脈粥樣硬化這一特殊群體的臨床治療產(chǎn)生積極的推動作用。
　　在世界范圍內(nèi)，卵巢癌在婦科腫瘤中的發(fā)病率位居第三位，而死亡率位居首位。原發(fā)性卵巢癌起病過程隱匿，給早期發(fā)現(xiàn)早期診

5、斷帶來極大困難，超過80%的患者在確診時已處于晚期。目前，卵巢癌5年生存率僅為44%左右。對于早期卵巢癌患者主要以手術治療為主，晚期患者行腫瘤細胞減滅術，輔助以化療。作為卵巢癌化療的基礎用藥，順鉑具有抗癌譜廣、療效確切、與多種抗腫瘤藥物有協(xié)同作用且無交叉耐藥等特點，但其毒副作用較明顯，常見的有胃腸道反應，過敏反應，神經(jīng)毒性，腎臟毒性，骨髓抑制等。所以近年來大量的研究在尋找與順鉑聯(lián)合應用的藥物，以期降低順鉑的用藥劑量或改善順鉑造成的毒副作

6、用。硫辛酸作為一種可以在體內(nèi)合成含硫脂肪酸，被看作是維生素，毒性較低。它可以通過促進腫瘤細胞凋亡，抑制腫瘤細胞增殖，抑制腫瘤新生血管生成，增強機體免疫力，增加腫瘤對化療藥物敏感性，逆轉腫瘤耐藥等作用來發(fā)揮抗腫瘤作用。本文旨在研究硫辛酸聯(lián)合順鉑治療卵巢癌的療效，為臨床治療卵巢癌減輕基礎用藥毒副作用提供新的思路。
　　第一部分聯(lián)合應用硫辛酸和順鉑對卵巢癌細胞的治療作用的研究
　　目的：順鉑作為臨床治療卵巢癌的基礎用藥具有較明顯的

7、毒副作用，本研究旨在探討硫辛酸聯(lián)合順鉑治療卵巢癌的療效，以減小順鉑的用藥劑量，改善順鉑的毒副作用。
　　方法：用硫辛酸和順鉑單獨或聯(lián)合處理3種卵巢癌細胞系 SKOV3、EFO27、IGROV1，采用克隆形成實驗、3D-Culture實驗觀察硫辛酸和順鉑單獨或聯(lián)合應用對3種卵巢癌細胞的抑制效率，利用劃痕實驗觀察硫辛酸和順鉑對3種卵巢癌細胞遷移能力的影響，利用彗星實驗、免疫熒光實驗觀察硫辛酸和順鉑對3種卵巢癌細胞DNA損傷和修復過程的

8、影響。
　　結果：
　　1、硫辛酸和順鉑都可以呈劑量依賴性的抑制卵巢癌細胞的增殖，且聯(lián)合應用硫辛酸和順鉑抑制效果更加明顯；
　　2、硫辛酸和順鉑都可以抑制卵巢癌細胞遷移，且聯(lián)合應用抑制遷移的效果更加明顯；
　　3、硫辛酸和順鉑都可以導致卵巢癌細胞 DNA損傷，且聯(lián)合應用，效果更加明顯。
　　結論：
　　1、硫辛酸和順鉑均可以抑制卵巢癌細胞的增殖、遷移，導致卵巢癌細胞 DNA損傷，且聯(lián)合應用，效果更加明

9、顯；
　　2、聯(lián)合應用硫辛酸和順鉑是治療卵巢癌的有效方案。
　　第二部分硫辛酸治療絕經(jīng)后女性動脈粥樣硬化及機制的研究
　　目的：絕經(jīng)后女性由于失去了雌激素抗炎、抗氧化、抗內(nèi)皮細胞凋亡、降低血脂、膽固醇、增加蛋白質(zhì)合成等的保護作用，患動脈粥樣硬化的風險大大增加。而近年來研究發(fā)現(xiàn)，雌激素替代療法雖然可以顯著緩解臨床癥狀，但并不能改善預后。本研究旨在探討硫辛酸通過清除體內(nèi)過量的活性氧，解除活性氧對雌激素受體的抑制作用，從而上

10、調(diào)雌激素受體的表達，促進雌激素發(fā)揮抗動脈粥樣硬化的生理功能，為臨床治療絕經(jīng)后女性動脈粥樣硬化提供新的思路。
　　方法：
　　1、我們隨機將40只16周齡LDL-R-/-雌鼠均分為5組，第1組飼喂正常飲食；第2組飼喂高脂飲食；第3組行卵巢去勢手術后飼喂高脂飲食；第4組行卵巢去勢手術后飼喂高脂飲食，同時進行低劑量硫辛酸（70 mg/kg）灌胃；第5組行卵巢去勢手術后飼喂高脂飲食，同時進行高劑量硫辛酸（210 mg/kg）灌胃。灌

11、胃持續(xù)16周，每周監(jiān)測小鼠體重變化，隨后將小鼠處死，血液樣本經(jīng)離心后將血清保存于-80°；
　　2、人主動脈內(nèi)皮細胞（human aortic endothelial cells，HAECs）經(jīng)過不同濃度硫辛酸（75,150,300μM）處理20小時后加入H2O2（1.2mM）4小時，以誘導氧化應激損傷；
　　3、采用乳酸脫氫酶、丙二醛、過氧化物歧化酶、谷胱甘肽試劑盒檢測經(jīng)過H2O2和硫辛酸處理后的HAECs的LDH、MDA

12、、SOD、GSH水平的變化；
　　4、采用免疫印跡法（Western Blot）實驗檢測Cleaved Caspase-3、Bcl-2、ICAM-1、VCAM-1、Nox4、p22phox、I?Bα、phosphorylated p65、ERα、ERβ相關蛋白的表達；
　　5、采用免疫熒光（immunofluorescent assay，IF）方法檢測p65、ERα基因的表達；
　　6、采用流式細胞儀分析硫辛酸對HAE

13、Cs細胞內(nèi)產(chǎn)生的活性氧（reactive oxygen species，ROS）的清除率；
　　7、采用免疫組化（Immunohistochemistry，IHC）方法檢測 CD68、ICAM-1、VCAM-1、Nox4、phosphorylated p65的表達。
　　結果：
　　1、硫辛酸保護HAEC細胞免受H2O2誘導的氧化應激損傷；
　　2、硫辛酸既可以在細胞層面上抑制內(nèi)皮細胞凋亡，也可以在動物水平上抑制

14、小鼠主動脈內(nèi)皮細胞及粥樣斑塊的凋亡；
　　3、硫辛酸能夠抑制由H2O2引起的黏附因子ICAM-1、VCAM-1的過表達，抑制THP-1（Human acute monocytic leukemia cell）細胞黏附于受損的內(nèi)皮細胞；
　　4、硫辛酸能夠抑制由H2O2引起的Nox4、p22phox的過表達；
　　5、硫辛酸能夠上調(diào)I?Bα的表達，同時下調(diào)phosphorylated p65的表達；
　　6、硫辛酸

15、能夠上調(diào)雌激素受體的表達；
　　7、與卵巢去勢飼喂高脂飲食組相比，硫辛酸灌胃組小鼠體重增加并不明顯；
　　8、硫辛酸能明顯抑制小鼠主動脈內(nèi)粥樣硬化斑塊的形成。
　　結論：
　　1、硫辛酸能夠抑制氧化應激、抑制內(nèi)皮細胞凋亡、抑制黏附因子 ICAM-1、VCAM-1的表達，從而抑制單核/巨噬細胞系統(tǒng)黏附于受損的內(nèi)皮細胞表面；
　　2、硫辛酸通過下調(diào)Nox4、p22phox的表達來抑制活性氧的產(chǎn)生，從而解除活性氧