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文檔簡介
1、目的:
研究大蒜中的主要成分S-烯丙基半胱氨酸(S-allylcysteine, SAC)對非酒精性脂肪肝(Non-alcoholic fatty liver disease, NAFLD)大鼠的肝保護作用,并對其可能的作用機制進行探討。
方法:
1.動物實驗分組及造模:正常組(Normal)、非酒精性脂肪肝模型組(Model)、SAC低、中、高劑量組及阿伐他汀鈣組(Atorvastatin calcium
2、, ATC)。其中正常組喂養(yǎng)普通飼料,其余各組喂養(yǎng)高脂飼料。SAC低、中、高組分別每天灌胃(Intragastrical, ig)同體積不同濃度的SAC,其劑量分別為25mg/kg,50mg/kg,100mg/kg。高脂飼料持續(xù)喂養(yǎng)12周,每天稱取各組大鼠觀察其體重變化以及大鼠活動情況。于第4,6,8周模型組剪尾取血檢測血清中甘油三酯(Total triglyceride, TG)、膽固醇(Total cholesterol, TC)、
3、高密度脂蛋白(High density lipoprotein cholesterol, HDL-C)和低密度脂蛋白(Low density lipoprotein cholesterol, LDL-C),并按血脂水平、體重以及肝組織切片病理學(xué)標準篩選符合條件的脂肪肝大鼠。
2.SAC體外抗氧化作用:采用DPPH、ABTS、還原力、β-胡蘿卜素漂白法(β-beaching)、硫氰酸鐵法(Ferric thioeyanate,
4、FTC)和硫代巴比妥酸法(Thiobarbituric acid, TBA)方法檢測SAC的體外抗氧化作用。
3.SAC對非酒精性脂肪肝大鼠的血脂水平影響以及體內(nèi)抗氧化作用:連續(xù)ig12周后,各組大鼠心臟取血并分離血清,同時將每組大鼠肝組織勻漿,檢測血清和肝臟中TG、TC、HDL-C、LDL-C、游離脂肪酸(Nonesterified Free fatty acid, NEFA)、超氧化物歧化酶(Superoxide dism
5、utase, SOD)活性、丙二醛(Malondialdehyde, MDA)水平、谷胱甘肽(Glutathione, GSH)含量和谷胱甘肽過氧化酶(Glutathione peroxidase, GSH-PX)的活性。
4.SAC對非酒精性脂肪肝大鼠的肝損傷的影響:檢測血清和肝組織內(nèi)谷丙轉(zhuǎn)氨酶(Alanine aminotransferase, ALT)和谷草轉(zhuǎn)氨酶(Aspartate aminotransferase,
6、AST)水平以及肝臟組織切片 HE(Hematoxylin and eosin stain)染色。同時用Western blot法檢測肝組織中凋亡相關(guān)因子Bcl-2和Cleaved Caspase-3表達。
結(jié)果:
1.給藥連續(xù)12周后,與正常組相比,喂養(yǎng)高脂飼料的模型組體重明顯重于正常組,有顯著性差異(p<0.05);與模型組相比,SAC低、中、高劑量組和ATC組均有不同程度的體重減輕,且SAC高劑量組和ATC組均
7、有顯著性差異(p<0.05)。在肝重方面,模型組肝重明顯重于正常組及SAC高劑量組和ATC組。與正常組相比,模型組肝指數(shù)有顯著差異(p<0.01);與模型組相比,SAC高劑量組和ATC組肝指數(shù)均有顯著性差異(p<0.01);HE染色結(jié)果顯示:正常組肝細胞在12周末未出現(xiàn)任何脂肪侵潤,而模型組肝細胞出現(xiàn)大量的脂肪空泡, SAC低、中、高劑量組脂肪空泡相對減少,且脂質(zhì)沉積的程度有一定的緩解。與模型組相比,血清和肝組織中 ALT、AST水平均
8、下降且有顯著性差異(p<0.05);與正常組相比,TG、TC、LDL-C顯著升高,HDL-C明顯降低且有明顯差異(p<0.05)。與模型組相比,TG、TC、LDL-C隨著SAC濃度升高而降低,而HDL-C則降低,均有顯著性差異(p<0.05)。
2.抗氧化實驗結(jié)果顯示:SAC有一定的抗氧化作用;而β-beaching、FTC和TBA法的結(jié)果顯示SAC在脂質(zhì)抗氧化作用方面的能力較強;體內(nèi)抗氧化實驗結(jié)果顯示:模型組中血清和肝臟的S
9、OD和GSH-PX的活性均低于正常組,MDA的水平和GSH的含量均高于正常組(p<0.05)。SAC低、中、高劑量組中隨著藥物濃度的遞增,SOD和GSH-PX的活性也隨著增加,而MDA的水平和GSH的含量處于一個逐漸遞減的趨勢且呈劑量依賴性;Western blot法檢測結(jié)果顯示:SAC低、中、高劑量組中Bcl-2表達明顯升高,而Cleaved caspase-3的表達則明顯降低。
結(jié)論:
SAC具有較強的體內(nèi)、外抗
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