PKM2和USP18在食管鱗癌組織中的表達(dá)及臨床病理意義.pdf

1、背景與目的
　　食管癌在全球惡性腫瘤中排名第四位，病理類型以鱗狀細(xì)胞癌（ squamous cell carcinoma，SCC）最為多見。據(jù)大數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)報(bào)道，食管癌的5年生存率在30％左右（15%～42%）。我國(guó)河南省林縣是食管癌的高發(fā)區(qū)，相對(duì)于其他惡性上皮源性的腫瘤，該區(qū)域的食管癌死亡率明顯高于全國(guó)平均水平。
　　就腫瘤的發(fā)病機(jī)制來(lái)講，腫瘤的異質(zhì)化是由多元素導(dǎo)致的，例如外界化學(xué)物質(zhì)刺激、基因突變、內(nèi)環(huán)境紊亂或者是機(jī)體自身正

2、常代謝停滯、異常代謝活躍等。某種因子在機(jī)體代謝活動(dòng)中生成增多會(huì)影響正常的代謝過(guò)程，導(dǎo)致在細(xì)胞水平或者是基因水平上對(duì)整個(gè)機(jī)體的穩(wěn)態(tài)構(gòu)成威脅，進(jìn)而出現(xiàn)腫瘤樣變。因此，確定腫瘤基因突變位點(diǎn)是研究腫瘤發(fā)展進(jìn)程的關(guān)鍵。M2型丙酮酸激酶（pyruvate kinase M2，PKM2）作為糖酵解途徑中最重要的調(diào)節(jié)酶，能夠?qū)μ墙徒膺^(guò)程產(chǎn)生的大分子物質(zhì)的數(shù)量起到了關(guān)鍵性的掌控作用，同時(shí)為腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)代謝提供了所需的能量和原料，也對(duì)腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)周期起

3、到了調(diào)控作用。泛素特異性蛋白酶18（Ubiquitin specific protease18，USP18）作為一種干擾素誘導(dǎo)基因，在人體內(nèi)環(huán)境中主要扮演去泛素化的作用，受損組織被機(jī)體識(shí)別后會(huì)與ISG15（類泛素干擾素刺激基因）形成泛素化復(fù)合物，進(jìn)而被吞噬細(xì)胞或水解酶降解清除。而USP18阻斷ISG15發(fā)揮泛素化作用，進(jìn)而防止損傷的靶細(xì)胞被吞噬細(xì)胞降解或被水解酶水解，導(dǎo)致?lián)p傷細(xì)胞在體內(nèi)堆積不能及時(shí)清除，使腫瘤細(xì)胞處在營(yíng)養(yǎng)豐富的環(huán)境內(nèi)，達(dá)

4、到促進(jìn)腫瘤異質(zhì)化進(jìn)程的效果，進(jìn)而對(duì)腫瘤的生長(zhǎng)代謝起到推動(dòng)作用。
　　近年來(lái)尋找生物學(xué)標(biāo)記物成為了了解食管癌的腫瘤發(fā)病機(jī)制以及探索食管癌的早期篩查指標(biāo)和靶向治療位點(diǎn)的研究熱點(diǎn)，既能在探索食管癌發(fā)生發(fā)展的同時(shí)對(duì)食管癌做出早期診斷，又能進(jìn)行靶向?qū)ΠY治療以提高生存率。明確腫瘤的突變點(diǎn)能夠從根本上遏制食管癌的發(fā)生，也能夠從分子角度扭轉(zhuǎn)腫瘤的單克隆現(xiàn)象，促進(jìn)有腫瘤化趨勢(shì)的細(xì)胞發(fā)生凋亡，調(diào)節(jié)正常細(xì)胞進(jìn)行常規(guī)的新陳代謝。進(jìn)而，能夠響應(yīng)“早發(fā)現(xiàn)、早

5、診斷、早治療”的醫(yī)療目標(biāo)，對(duì)于提高食管癌患者的生存率、減少患者的致死率起到?jīng)Q定性的作用，也對(duì)食管癌的臨床治療效果和結(jié)局起到顯著改善和指導(dǎo)的效果。
　　本研究通過(guò)免疫組織化學(xué)法觀察PKM2和USP18在食管鱗狀細(xì)胞癌組織、正常食管黏膜組織以及食管鱗狀上皮內(nèi)瘤變組織（低級(jí)別和高級(jí)別）中的表達(dá)情況，以及分析在不同分化程度、浸潤(rùn)深度、年齡、性別、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等情況下的食管鱗癌組織中的差異性表達(dá)狀況，觀察其表達(dá)差異性是否與食管鱗狀上皮的異型增

6、生的進(jìn)程以及各臨床指標(biāo)有關(guān)，對(duì)于探討PKM2和USP18在推進(jìn)食管癌發(fā)生過(guò)程中的作用有很大的幫助作用。
　　方法
　　1.篩選60例于2015年01月～2015年12月間由鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院病理科診斷為食管鱗狀細(xì)胞癌的病例，其中高分化、中分化、低分化鱗狀細(xì)胞癌組織各20例。病例標(biāo)本均為手術(shù)切除后的食管大標(biāo)本，經(jīng)常規(guī)病理取材，病理報(bào)告中有明確的腫物大小、位置、分化程度、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及切緣是否取干凈等情況。另外選取6

7、0例正常食管黏膜組織，以及60例經(jīng)ESD或EMR切除后診斷為鱗狀上皮內(nèi)瘤變的組織，其中高級(jí)別、低級(jí)別鱗狀上皮內(nèi)瘤變組織各30例。
　　2.實(shí)驗(yàn)運(yùn)用免疫組織化學(xué)技術(shù)對(duì)食管鱗癌組織、食管鱗狀上皮內(nèi)瘤變組織以及正常食管黏膜組織進(jìn)行USP18和PKM2的染色，嚴(yán)格按照SP免疫組化二步染色法的步驟進(jìn)行。免疫標(biāo)記物 PKM2的陽(yáng)性對(duì)照采用胃腺癌組織，免疫標(biāo)記物USP18的陽(yáng)性對(duì)照采用肝癌組織，兩者陽(yáng)性染色位于細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)中，陰性對(duì)照均為不加

8、一抗染色的食管鱗癌組織。
　　3.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：運(yùn)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析處理，對(duì)癌組織、食管鱗狀上皮內(nèi)瘤變組織、正常食管黏膜組織以及不同臨床指標(biāo)下的食管癌組織進(jìn)行獨(dú)立的兩組二分類和多組二分類比較，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。
　　結(jié)果
　　1、PKM2在食管鱗癌組織、食管鱗狀上皮內(nèi)瘤變組織以及正常食管黏膜組織中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為63.3%、30%、11.7%，且3組間比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=36.19，P＜

9、0.05）。可見，PKM2在食管鱗癌組織中的表達(dá)顯著高于其在食管鱗狀上皮內(nèi)瘤變組織以及食管正常黏膜組織中的表達(dá)。另外在低級(jí)別和高級(jí)別鱗狀上皮內(nèi)瘤變組織中PKM2的表達(dá)陽(yáng)性率分別是16.7%和43.3%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=5.08，P＜0.05）。
　　2、USP18在食管鱗癌組織、食管鱗狀上皮內(nèi)瘤變組織以及正常食管黏膜組織中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為65%、31.7%、3.3%，3組間比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=51.45，P

10、＜0.05）。可見，USP18在食管鱗癌組織中的表達(dá)程度也是明顯高于其在食管鱗狀上皮內(nèi)瘤變組織以及正常食管黏膜組織中的表達(dá)。USP18在低級(jí)別和高級(jí)別鱗狀上皮內(nèi)瘤變組織中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為23.3%和40.0%，雖然陽(yáng)性表達(dá)有逐漸增加的趨勢(shì)，但是與PKM2不同，USP18在低級(jí)別和高級(jí)別鱗狀上皮內(nèi)瘤變組織中的陽(yáng)性表達(dá)差異性很小，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=1.93， P>0.05）。
　　3、將診斷為食管鱗癌的病例根據(jù)不同的臨床指標(biāo)（