H6R6短肽修飾的殼聚糖納米粒用于siRNA的遞送及其在腫瘤治療中的應(yīng)用.pdf

1、近年來(lái)，基因療法已成為癌癥治療的重要手段之一，其中，小干擾RNA（siRNA）藥物已受到醫(yī)藥領(lǐng)域廣泛關(guān)注。但是，siRNA藥物在體內(nèi)穩(wěn)定性差、易被核酸酶降解，半衰期短，這些缺陷限制了siRNA的臨床應(yīng)用。因此，發(fā)展能夠高效遞送siRNA藥物的載體已成為本領(lǐng)域急需解決的難題。
　　本課題構(gòu)建了能夠高效遞送siRNA的非病毒載體，并應(yīng)用篩選出的載體加載siRNA制備納米粒，進(jìn)行體內(nèi)外抗腫瘤的研究。首先，將6-聚精氨酸-6-聚組氨酸(H

2、6R6)短肽偶聯(lián)到殼聚糖高分子鏈游離氨基末端，制備H6R6-CS共聚物作為siRNA遞送載體，并利用1H-NMR分析方法對(duì)其結(jié)構(gòu)進(jìn)行鑒定。然后選用不同類(lèi)型的細(xì)胞，通過(guò)MTT方法對(duì)H6R6-CS共聚物進(jìn)行細(xì)胞毒性評(píng)價(jià)，研究結(jié)果表明，合成的H6R6-CS共聚物安全無(wú)毒。采用酸堿滴定法考察H6R6-CS共聚物的緩沖能力，發(fā)現(xiàn)其在pH3.5-6.5之間存在明顯緩沖能力。以復(fù)凝聚法制備載siRNA的納米粒，并對(duì)其表面形態(tài)、粒徑、Zeta電位、穩(wěn)定

3、性等理化性質(zhì)進(jìn)行考察，結(jié)果顯示所制備的納米粒的平均粒徑在175nm左右，Zeta電位在+14.8mV左右、粒徑分布范圍較窄，納米粒呈圓球狀，且表面光滑。
　　選擇能夠穩(wěn)定表達(dá)Luciferase基因的4T1細(xì)胞，考察H6R6短肽修飾后的納米粒對(duì)內(nèi)源基因的表達(dá)的抑制情況，研究結(jié)果表明，其抑制率可達(dá)50％。同時(shí)利用流式細(xì)胞術(shù)和激光共聚焦顯微鏡法考察納米粒的入胞情況，利用激光共聚焦法考察了納米粒的溶酶體逃逸能力，研究結(jié)果表明，H6R6短

4、肽修飾后的納米粒被腫瘤細(xì)胞的攝取率顯著增強(qiáng)，并在轉(zhuǎn)染6h后，能迅速逃離溶酶體。
　　選擇靶向Survivin和BRAF基因的功能性siRNA制備納米粒，研究納米粒對(duì)4T1和A375兩種腫瘤細(xì)胞的體外殺傷效果。研究結(jié)果表明:轉(zhuǎn)染48h后，兩種納米粒抑制細(xì)胞增殖的效率達(dá)到最大，分別為49％和51％。細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:修飾后的納米粒能夠顯著誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡。
　　選擇靶向Survivin和BRAF基因的功能性siRNA制備納米