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文檔簡介
1、目的:利用小鼠大腦中動脈栓塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型和糖氧剝奪(oxygen glucose derive,OGD)神經(jīng)元細胞模型,研究基于gp130/STAT3通路的IL-27對腦缺血再灌注損傷的保護機制。
方法:
1.健康SPF級小鼠隨機分為假手術(shù)組(SHAM),模型組(MCAO),IL-27干預(yù)組(IL-27)共3組。造模后行神經(jīng)行為學評估(包括Bede
2、rson評分和beam walking test評分)和氯化三苯四唑(triphenyltetrazolium chloride,TTC)染色。IL-27干預(yù)組每日IL-27腹腔注射連續(xù)7日。采用ELISA法研究MCAO小鼠腦組織中相關(guān)炎癥介質(zhì)的表達;RT-PCR研究信號傳導與轉(zhuǎn)錄激活因子3(Signal Transduction and Activators ofTranscription3,STAT3)mRNA表達水平;Westem
3、 blot研究磷酸化STAT3(Phosphorylated STAT3,pSTAT3)表達水平。
2.采用胎鼠皮層神經(jīng)元細胞原代培養(yǎng)制備神經(jīng)元細胞糖氧剝奪模型,通過檢測LDH濃度,觀察OGD對神經(jīng)元細胞細胞毒性的影響;用流式細胞儀和Western blot方法,檢測IL-27對OGD神經(jīng)元細胞的凋亡和、pSTAT3蛋白表達水平的影響;通過gp130 siRNA和IL-27干預(yù)OGD神經(jīng)元細胞,觀察gp130 siRNA對經(jīng)I
4、L-27處理的OGD神經(jīng)元細胞pSTAT3和Bcl2蛋白表達的影響;通過采用STAT3磷酸化阻斷劑sttatic阻斷 STAT3的磷酸化,觀察sttatic對經(jīng)IL-27處理的OGD神經(jīng)元細胞的pSTAT3蛋白、Bcl2蛋白表達和細胞毒性的影響。
結(jié)果:
1.缺血再灌注7天后,Bederson評分和Beam walking test評分顯示IL-27組評分分別為(1.60±0.55和2.20±0.45)均低于MCAO
5、組評分(2.40±0.55和3.00±0.61)(均P<0.05); IL-27組腦梗死體積百分比(12.45±6.18%)較MCAO組(38.89±5.99%)減少(P<0.05);IL27組的促炎因子(TNF-α、 IL-1β、MCP-1)的濃度(分別為232.24±26.59、36.16±6.63、28.70±2.47)均低于MCAO組(分別為473.70±36.34、51.85±10.19、68.16±7.69)(均P<0.05
6、),抗炎因子(IL-10、TGFβ)(23.69±7.60、49.17±8.17)均高于MCAO組(12.56±3.78、25.45±5.49)(均P<0.05)。
2.缺血再灌注7天后,IL-27組STAT3 mRNA的表達(3.15±0.60倍)高于MCAO組高(2.52±0.430倍)P<0.05),IL-27組pSTAT3表達(5728.80±368.11)也高于MCAO組(3025.20±647.74)(P<0.05
7、))。
3.IL-27組的LDH濃度(239.19±10.52)明顯低于OGD組(371.65±43.34)(P<0.05);IL-27組總凋亡率(55.14±17.76%)低于OGD模型組(81.87±2.81%)(P<0.05)。
4.OGD+gp130 siRNA+IL-27組pSTAT3(1023.33±173.08)和Bcl2的表達水平(1320.0±244.06)均較OGD+CON+IL-27組(1426
8、.0±196.55、1790±280.26)明顯減少(均p<0.05),而且OGD+gp130 siRNA組pSTAT3水平(650.0±239.74)和Bcl2的表達(879±204.59)均較OGD+CON組(1035.67±74.01、1035.67±74.01)明顯減少(均P<0.05)5.OGD+IL-27+Stattic-10μM組的LDH濃度(231.05±18.09)與OGD組(234.71±16.41)的差異無統(tǒng)計學意
9、義(P>0.05),OGD+IL-27+stattic-5μM組和OGD+IL-27組LDH濃度(98.90±6.11、130.94±12.03)高于 OGD組(243.71±16.41)(均P<0.05);OGD+IL-27+stattic-10μM組pSTAT3(674.33±173.32)和Bcl2表達水平(531±133.72)較OGD組(622.33±137.55、466±120.80)稍高,但差異無統(tǒng)計學意義(均>0.05)
10、;而在 OGD+IL-27+stattic-5 tM組和 OGD+IL-27組的pSTAT3(1414.67±315.69、1373.67±277.29)和Bcl2(1050.33±272.26、901±234.04)的表達均高于OGD組(622.33±137.55、466±120.80)(均P<0.05)。
結(jié)論:
1、IL-27可以改善大腦缺血再灌注模型小鼠的運動功能和縮小梗死體積,抑制梗死部位促炎因子的表達并增
11、加抑炎因子的表達。
2、IL-27能減輕糖氧剝奪(OGD)對神經(jīng)元細胞的細胞毒性,減少神經(jīng)元細胞的凋亡。
3、IL-27能促進STAT3 mRNA的表達、增加pSTAT3蛋白表達。
4、gp130 siRNA可以抑制IL-27促進STAT3磷酸化和增加Bcl2表達的作用。
5、gp130 siRNA和Stattic能抑制IL-27對OGD神經(jīng)元細胞的保護作用。
總之,IL-27對腦缺血再
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