MYH9相關(guān)綜合征一家系的遺傳學(xué)分析.pdf

1、目的:MYH9相關(guān)綜合征(MYH9-RD)是MYH9基因突變導(dǎo)致的，具有耳聾、腎炎、白內(nèi)障或凝血障礙等一種或多種臨床癥狀的遺傳病。因MYH9-RD屬于罕見(jiàn)病，它的血象與特發(fā)性血小板減少性紫癜(ITP)相似，醫(yī)院常將MYH9-RD誤診為ITP，做不必要的激素治療甚至是脾切除手術(shù)。因此對(duì)疑似MYH9-RD患者進(jìn)行基因診斷十分必要。本研究通過(guò)MYH9基因測(cè)序，從基因水平上對(duì)誤診為ITP的一家系患者作出確診，找到致病突變并分析基因型與表型的關(guān)系

2、，對(duì)家系患者進(jìn)行遺傳學(xué)分析。
　　方法:采集家系患者和健康對(duì)照者外周血，檢測(cè)血常規(guī)。分別用光學(xué)顯微鏡和透射電鏡觀察患者中性粒細(xì)胞、血小板及其細(xì)胞器的形態(tài)結(jié)構(gòu)特點(diǎn)。根據(jù)NCBI參考序列設(shè)計(jì)PCR擴(kuò)增MYH9蛋白編碼區(qū)的引物，對(duì)MYH9基因序列和突變片段進(jìn)行一代測(cè)序、克隆測(cè)序和酶切實(shí)驗(yàn)，確定突變位點(diǎn)和類型。并進(jìn)行線粒體全基因組測(cè)序?qū)ふ壹膊∠嚓P(guān)SNP。最后使用計(jì)算軟件預(yù)測(cè)突變蛋白對(duì)機(jī)體的影響和序列保守性分析。
　　結(jié)果:8名家系患

3、者的血常規(guī)檢測(cè)有“巨大血小板、血小板數(shù)量減少和中性粒細(xì)胞含包涵體”的MYH9-RD三聯(lián)征，其中一人的血小板數(shù)量在正常值的下限內(nèi)（122×109/L）?；颊哂衅つw易挫傷、紫癜消退緩慢等癥狀，但臨床表現(xiàn)略有不同?；驕y(cè)序結(jié)果表明，家系所有8例患者的MYH9基因c.5803delG雜合缺失，導(dǎo)致移碼突變，造成非肌肉肌球蛋白重鏈ⅡA(NMMHC-ⅡA)的羧基端非螺旋尾部的蛋白截短，共涉及26個(gè)氨基酸變異（p.Ala1935Profs*13）。而

4、家系內(nèi)和非家系健康人均無(wú)此突變。透射電鏡結(jié)果顯示，患者的血小板內(nèi)細(xì)胞器含量差異大，其中開(kāi)發(fā)管道數(shù)量與血小板體積成比例增加。PROVEAN軟件預(yù)測(cè)變異蛋白對(duì)機(jī)體有害（score=-3.67＜-2.5），Mutation Taster計(jì)算表明變異區(qū)域的氨基酸序列在哺乳動(dòng)物中是部分保守，預(yù)測(cè)變異能引起疾病。
　　結(jié)論:在有8名患者的家系中，c.5803delG突變與疾病共分離，是該家系患者的致病突變。NMMHC-ⅡA的異常磷酸化可能是導(dǎo)