果蠅Dscam外顯子簇6互斥可變剪接中順式作用元件LCR的調(diào)控功能研究.pdf

1、可變剪接是產(chǎn)生蛋白質(zhì)多樣性的重要途徑，互斥可變剪接是可變剪接的重要形式之一?；コ饪勺兗艚邮侵冈趍RNA前體中有兩個(gè)或更多個(gè)可變外顯子連續(xù)排列在一起，但最終只有一個(gè)可變外顯子被剪接到成熟的mRNA中，而不會(huì)出現(xiàn)兩個(gè)或多個(gè)可變外顯子同時(shí)被剪接的情況?；コ饧艚幼钔怀龅睦邮呛诟构壧剖暇C合癥細(xì)胞粘附因子(Dscam)，它通過(guò)95個(gè)可變外顯子的互斥剪接可以產(chǎn)生38,016種不同的軸突導(dǎo)向受體。之前研究人員提出的錨定位點(diǎn)—選擇序列相互作用的假說(shuō)能

2、很好的解釋Dscam外顯子簇6的互斥剪接機(jī)制并且該假說(shuō)已經(jīng)得到本實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)證實(shí)，但是其啟動(dòng)被選擇的可變外顯子的具體機(jī)制還不清楚。
　　 該研究通過(guò)比較基因組學(xué)、刪除突變實(shí)驗(yàn)等方法在Dscam外顯子簇6錨定位點(diǎn)上游分析鑒定出一個(gè)對(duì)可變外顯子的剪接起重要作用的RNA結(jié)構(gòu)性順式作用元件——基因座控制區(qū)(LCR)。突變、互補(bǔ)突變等實(shí)驗(yàn)證實(shí)該元件可以通過(guò)形成6個(gè)串聯(lián)的RNA二級(jí)結(jié)構(gòu)的形式起作用。
　　 之前的研究結(jié)果指出，hrp3

3、6是結(jié)合在外顯子簇6上的抑制蛋白。通過(guò)RNA干擾去除hrp36的抑制作用，會(huì)出現(xiàn)多個(gè)可變外顯子6剪接在一起的情況。但是我們的研究結(jié)果表明，即使是Δhrp36的可變外顯子仍需要LCR元件的存在才能被剪接。這說(shuō)明LCR元件對(duì)可變外顯子的剪接是必需的。進(jìn)一步研究表明，LCR元件是通過(guò)增強(qiáng)較弱剪接信號(hào)識(shí)別的方式啟動(dòng)被選擇的可變外顯子。
　　 該研究闡釋了一種基因座控制區(qū)依賴性的互斥剪接機(jī)制，錨定位點(diǎn)—選擇序列形成的二級(jí)結(jié)構(gòu)與LCR元件共