Dead-box RNA解旋酶DDX25和DDX3X在登革病毒感染中的作用.pdf

1、登革病毒是當(dāng)今世界分布最廣泛的一種蟲媒病毒，為單股正鏈RNA病毒，主要由埃及伊蚊和白紋伊蚊傳播。人類、靈長類動(dòng)物和蚊蟲是登革病毒的天然宿主。人體被登革病毒感染后表現(xiàn)的癥狀不同，嚴(yán)重的會(huì)引發(fā)登革出血熱和登革休克綜合癥甚至死亡。據(jù)統(tǒng)計(jì)，每年大約新增數(shù)百萬登革病毒感染。由于登革病毒感染的機(jī)制仍不明確，各血清型之間抗原性存在交叉、存在抗體依賴的增強(qiáng)作用等，至今仍無安全有效的疫苗可用。
　　含Dead-box結(jié)構(gòu)域的RNA解旋酶DDX家族屬

2、于剪接因子2解旋酶超家族的一類，參與了RNA代謝的多種過程。此外，一些Dead-box RNA解旋酶被報(bào)道能夠參與抗病毒免疫反應(yīng)。在本研究中，我們采取了RNAi文庫篩選的方法，研究40多個(gè)Dead-box家族成員在登革病毒感染過程中的作用。我們篩選出DDX3X和DDX25作為研究對象，RNAi結(jié)果顯示，干擾 DDX3X能夠促進(jìn)登革病毒復(fù)制，而沉默DDX25能抑制登革病毒復(fù)制。
　　為了進(jìn)一步研究 DDX3X的抗病毒作用，我們在HE

3、K293T細(xì)胞中過表達(dá)DDX3X，進(jìn)行登革病毒感染實(shí)驗(yàn)。結(jié)果顯示，登革病毒的復(fù)制水平顯著降低。RNAi和過表達(dá)的結(jié)果說明DDX3X具有抗登革病毒的功能。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，在登革病毒感染早期，干擾DDX3X，IFN-β的表達(dá)水平降低；在登革病毒感染的條件下，過表達(dá)DDX3X后，IFN-β的表達(dá)水平顯著升高。而且DDX3X促進(jìn)了登革病毒誘導(dǎo)的IRF3的轉(zhuǎn)錄活性及磷酸化和二聚化。同時(shí)，我們發(fā)現(xiàn)DDX3X既促進(jìn)了RIG-I誘導(dǎo)的NFκB的轉(zhuǎn)錄活性

4、，也促進(jìn)了登革病毒誘導(dǎo)的NFκB的啟動(dòng)子活性。因此，我們得出結(jié)論，DDX3X在登革病毒感染的早期通過IRF3和NFκB兩條支路促進(jìn)了IFN-β的產(chǎn)生，抑制了登革病毒的復(fù)制。
　　不同于之前的文獻(xiàn)報(bào)道——DDX25是組織特異性表達(dá)的，我們發(fā)現(xiàn) DDX25在人體多種組織及細(xì)胞系中均表達(dá)，而且在細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核中均有分布。上皮細(xì)胞感染登革病毒后DDX25的表達(dá)量顯著升高。沉默DDX25能抑制登革病毒復(fù)制，而過表達(dá) DDX25，登革病毒的復(fù)

5、制水平顯著升高。這些結(jié)果表明 DDX25能夠促進(jìn)病毒復(fù)制。而對于具體機(jī)制的研究發(fā)現(xiàn)，在HEK293T細(xì)胞中，干擾DDX25后，IFN-β的表達(dá)水平顯著升高；過表達(dá) DDX25后，IFN-β的表達(dá)水平顯著降低。DDX25還能抑制SeV,VSV和polyI:C誘導(dǎo)的IFN-β的轉(zhuǎn)錄。在IFN-β信號(hào)通路中，DDX25抑制由RIG-I，MDA5，MAVS，TBK1，IRF3過表達(dá)所誘導(dǎo)的IFN-β的啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄活性，與此同時(shí)，DDX25也抑制了