冷凍保存非血管化異體骨關(guān)節(jié)移植免疫學(xué)研究.pdf

1、目的：創(chuàng)傷、惡性骨腫瘤切除引起大段骨關(guān)節(jié)缺損后的修復(fù)一直是困擾骨科界的一大難題。盡管修復(fù)該缺損的方式有很多，如關(guān)節(jié)融合、人工假體植入、自體骨關(guān)節(jié)移植和同種異體骨關(guān)節(jié)移植等，但各種方法均有利弊。目前，同種異體骨關(guān)節(jié)移植在臨床應(yīng)用非常廣泛，但免疫性問(wèn)題使其在臨床上的應(yīng)用受到很大的限制。本研究試圖從免疫學(xué)方面進(jìn)一步探討經(jīng)冷凍保存的同種異體骨關(guān)節(jié)移植后機(jī)體的免疫系統(tǒng)反應(yīng)情況，以期為同種異體骨關(guān)節(jié)移植的臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。
　　方法：實(shí)驗(yàn)

2、在具有不同組織相容性的純系大鼠之間進(jìn)行異體骨關(guān)節(jié)移植，采用Yaremchuk等設(shè)計(jì)的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型。30只Wistar大鼠作為供體，提供60個(gè)異體膝關(guān)節(jié)，90只SD大鼠作為受體，其中80只作為受體，余下10只作為同系移植供體。80只SD大鼠依次分為A（新鮮同系移植組）、B（新鮮異體移植組）、C（冷凍保存異體移植組）和D（新鮮異體移植術(shù)后用環(huán)孢霉素A組）四組，每組20只。所有供體均在膝關(guān)節(jié)上、下各1cm處截骨，徹底清除關(guān)節(jié)周圍的軟組織，生理

3、鹽水沖洗髓腔，移植時(shí)將此膝關(guān)節(jié)移植于受體同一部位腹部皮下。其中，移植到C組的異體關(guān)節(jié)在移植前需經(jīng)兩部冷凍法處理，D組大鼠于術(shù)后持續(xù)應(yīng)用環(huán)孢霉素A兩周。分別于術(shù)前和術(shù)后的第1、2、3、4、6、8、10及12周抽取SD大鼠的外周靜脈血借助流式細(xì)胞儀檢測(cè)移植前后淋巴細(xì)胞亞群變化，ELISA法檢測(cè)移植前后細(xì)胞因子IL-2，IFN-r，IL-4和IL-10變化。
　　結(jié)果：
　　1、四組的CD4+/CD8+和CD25+在最初兩周變化不

4、明顯，隨后B、C兩組從第二周開(kāi)始逐漸增加，并于第8周達(dá)到峰值，D組于第四周開(kāi)始升高，并于第十周達(dá)到最大值，而A組整個(gè)測(cè)量時(shí)間段內(nèi)，無(wú)明顯變化。從第3周至12周這段時(shí)間段內(nèi)，B組指標(biāo)明顯高于A組（p<0.01），且高于C、D兩組（p<0.05），CD4+/CD8+和CD25+值變化具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；C組指標(biāo)高于A組（p<0.05），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。D組所測(cè)指標(biāo)于第四周之后升高，并高于A組（p<0.05），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但與C組比較，

5、差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，（p>0.05）。
　　2、細(xì)胞因子IL-2、IFN-r、IL-10和IL-4在手術(shù)后的前兩周差異不大。隨后B、C兩組細(xì)胞因子從第二周開(kāi)始逐漸增加，并于第8周達(dá)到峰值；D組于第四周開(kāi)始升高，并于第十周達(dá)到最大值，而A組整個(gè)測(cè)量時(shí)間段內(nèi)，無(wú)明顯變化。從第3周至12周這段時(shí)間段內(nèi)，B組中IL-2和IFN-r的測(cè)量結(jié)果明顯高于A組（p<0.01），且高于C、D兩組（p<0.05），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；C組、D組所測(cè)

6、結(jié)果又高于A組（p<0.05），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而C、D兩組之間差異無(wú)顯著性（p>0.05)。C組、D組所測(cè)IL-10和IL-4明顯高于A、B兩組（p<0.01），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；C組與D組相比較，兩組指標(biāo)差異不大（p>0.05），不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；而B(niǎo)組所測(cè)IL-10和IL-4高于A組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，（p<0.05）。
　　結(jié)論：
　　1、冷凍保存的異體關(guān)節(jié)移植可以誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生一定程度的免疫排斥反；