海洋防污功能菌株的篩選及其活性物質(zhì)的研究.pdf

1、海洋生物污損是指海洋固著生物（如藤壺、貽貝、盤管蟲及海藻等）在人工設(shè)施表面的附著積聚。隨著海洋產(chǎn)業(yè)的不斷發(fā)展，海洋生物污損帶來的危害越發(fā)嚴(yán)重。有機(jī)錫及氧化亞銅防污涂料在過去幾十年間對(duì)海洋環(huán)境造成了巨大破壞，已被禁用或限用，因此有必要開發(fā)環(huán)保型海洋防污劑。海洋生物用于化學(xué)防御的次級(jí)代謝產(chǎn)物是開發(fā)環(huán)保型防污劑的潛在來源。然而防污活性化合物在生物體內(nèi)含量低微，供應(yīng)不足是環(huán)保型防污劑發(fā)展的主要問題。海洋微生物對(duì)污損生物具有生態(tài)作用，微生物產(chǎn)生的

2、某些次級(jí)代謝產(chǎn)物能夠誘導(dǎo)或抑制污損生物的附著。并且可以通過發(fā)酵或基因工程手段大規(guī)模生產(chǎn)，因此具有巨大開發(fā)潛力。
　　本文從滸苔、石莼、山海綿中分離共生、附生微生物，并對(duì)其粗提物進(jìn)行防污活性檢測(cè)，篩選出防污活性較高的菌株。對(duì)該菌株進(jìn)行鑒定并對(duì)其防污活性物質(zhì)進(jìn)行分段萃取，以防污活性為導(dǎo)向進(jìn)一步提取分離，獲得防污活性化合物。對(duì)所分離化合物以多種海洋污損生物為模型檢測(cè)其防污活性，并進(jìn)行海區(qū)試驗(yàn)。主要結(jié)果如下:
　　1.從滸苔、石莼、

3、山海綿共分離得到14株海洋微生物，結(jié)合實(shí)驗(yàn)室已有的12株海洋微生物，共獲得23株海洋微生物的乙酸乙酯相粗提物及11株海洋微生物的甲醇粗提物。通過活性檢測(cè)，共篩選到9株具有防污活性的菌株。其中Vibrio alginolyticus，Vibrio gallicu兩株菌防污活性最高，抑制藤壺幼體EC50分別為1.92和1.60μg/ml。
　　2.對(duì)兩株海洋細(xì)菌V.alginolyticus和V.gallicus活性物質(zhì)進(jìn)行不同相萃取

4、，經(jīng)活性檢測(cè)發(fā)現(xiàn)的二氯甲烷相和乙酸乙酯相提取物均表現(xiàn)出防污活性。其中V.alginolyticus兩相粗提物的EC50分別為3.9和2.82μg/ml，V.gallicus兩相粗提物的EC50分別為3.27及9.57μg/ml。HPLC分析發(fā)現(xiàn)V.alginolyticus的二氯甲烷相含有豐富的活性物質(zhì)。
　　3.對(duì)防污活性功能菌株V.alginolyticus 4個(gè)看家基因（rpoD、toX、rctB、gyrB）序列進(jìn)行測(cè)定。多

5、基因聯(lián)合分析表明，該菌株與GenBank中V.alginolyticus ATCC17749基因同源性最高。rpoD、toX、rctB、gyrB與該菌株的同源性分別為99％、98％、99％和99％?；?6SrDNA、rpoD、rctB、gyrB序列構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹均顯示，該功能菌株與V.alginolyticus ATCC17749親緣關(guān)系最近。結(jié)合生理生化特征實(shí)驗(yàn)，將該菌株鑒定為V.alginolyticus。
　　4.本文從