基于有機(jī)納米功能膜信號增強(qiáng)的生物傳感器檢測c-Myc蛋白.pdf

1、c-Myc蛋白是一種使細(xì)胞無限增值的原癌基因產(chǎn)物,在調(diào)節(jié)DNA合成、細(xì)胞分化、凋亡以及細(xì)胞周期的進(jìn)程中起著極其重要的作用,其過度表達(dá)易使細(xì)胞轉(zhuǎn)化為惡性表型。目前,許多生物學(xué)方法如酶聯(lián)免疫吸附分析法(ELISA)和聚合酶鏈反應(yīng)法(PCR)等,費時費力、成本高,因此快速檢測c-Myc含量的變化,對于癌癥的預(yù)防、診治有著非常重要的意義。本文針對如何增強(qiáng)生物傳感器響應(yīng)信號的關(guān)鍵問題,結(jié)合電化學(xué)分析技術(shù)簡便、快速、可實時輸出的特點,利用有機(jī)納米功

2、能材料的獨特性能,制備了三種信號放大的新型電化學(xué)免疫生物傳感器,用于實際樣品中c-Myc腫瘤蛋白的檢測,優(yōu)于傳統(tǒng)生物學(xué)方法,在癌癥預(yù)防、治療等生物醫(yī)學(xué)、分子生物學(xué)領(lǐng)域具有十分重要的研究價值和應(yīng)用前景。主要內(nèi)容如下:
　　 1.采用層層自組裝方法,制備了一種基于雙抗體夾心層修飾金電極的信號增強(qiáng)電化學(xué)生物傳感器,即先通過組裝L-半胱氨酸、戊二醛,固定c-Myc單克隆抗體(C-Abl),形成C-Abl單抗修飾電極,可識別致癌基因c-M

3、yc蛋白;再結(jié)合上第二抗體Anti-MouseIgG(H+L)Antibody(C-Ab2),形成C-Abl/c-Myc/C-Ab2雙抗夾心修飾電極,響應(yīng)信號大幅度增強(qiáng),傳感性能優(yōu)于C-Abl單抗修飾電極。通過電化學(xué)阻抗和循環(huán)伏安行為探討了雙抗夾心法信號增強(qiáng)的機(jī)理,其阻抗值與c-myc濃度對數(shù)在0.043nM～430nM范圍內(nèi)成良好的線性關(guān)系,最低檢測限也降低至25.76pM。該傳感器制備簡單,選擇性、重現(xiàn)性、穩(wěn)定性和再生性好,在鼠血清

4、樣品中測得c-Myc的回收率在97.4%～103.7%之間,表明該方法可用于實際腫瘤樣品中c-Myc的檢測,在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域具有潛在的應(yīng)用價值。
　　 2.以圓盤金電極為基底,制作了一種信號放大的新型生物傳感器,GNPs(Goldnanoparticles)標(biāo)記C-Ab2/c-Myc/C-Abl修飾電極,并運用交流阻抗法和循環(huán)伏安法探討了該傳感器的性能。研究了抗癌基因c-Myc蛋白在該修飾電極上的直接電化學(xué)反應(yīng)。實驗結(jié)果表明,采用

5、GNPs標(biāo)記的C-Ab2,即GNPsC-Ab2修飾電極比無GNPs標(biāo)記修飾電極的電化學(xué)響應(yīng)大,信號更強(qiáng)。該傳感器(C-Abl/c-Myc/C-Ab2-GNPs)的阻抗值與c-Myc濃度對數(shù)在4.3pM～43nM范圍內(nèi)成良好的線性關(guān)系,最低檢測限也降低至2.18pM。與方法1所制備的傳感器相比該傳感器具有較高的靈敏度,較好的重現(xiàn)性,良好的選擇性等優(yōu)點。在1%鼠血清中測得的c-Myc蛋白的回收率在96.3%～108.9%之間,表明該方法可用

6、于實際樣品中c-Myc的檢測。
　　 3.在方法1和方法2的基礎(chǔ)上,以金圓盤電極為基底,依次組裝1,6-己二硫醇、GNPs、L-cus、戊二醛、固定c-Myc單克隆抗體(C-Abl),形成C-Abl單抗修飾電極,識別c-Myc蛋白,結(jié)合GNPs標(biāo)記C-Ab2實現(xiàn)信號的放大。該傳感器(GNPs/C-Abl/c-Myc/C-Ab2-GNPs)的阻抗值與c-Myc濃度對數(shù)在0.86pM～8.6nM范圍內(nèi)成良好的線性關(guān)系,最低檢測限也降