HGF對(duì)NASH 小鼠肝組織內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的影響及意義.pdf

1、目的：建立NASH小鼠模型，通過觀察NASH小鼠模型證實(shí)NASH疾病發(fā)展過程中存在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激（endoplasmic reticulum stress，ER stress)；通過注射重組人肝細(xì)胞生長因子（recombinant human hepatocyte growth factor，rhHGF）,探討HGF對(duì)NASH肝組織ER stress的影響，為HGF在NASH患者中可能的臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。
　　方法：選用6W雄性S

2、PF級(jí)BALB/c小鼠18只，經(jīng)純化標(biāo)準(zhǔn)飼料AIN93M（10％kcal Fat）適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，第2周開始造模，定義為正常對(duì)照組（6只）和高脂組（12只）。對(duì)照組仍舊使用AIN93M（10%kcal Fat）進(jìn)行喂養(yǎng)，高脂組純化飲食選用TP23400（60%kcal Fat）喂養(yǎng)16周，在第17周末將高脂組分為NASH模型組（6只）和HGF組（6只），對(duì)HGF組小鼠進(jìn)行尾靜脈注射rhHGF，正常對(duì)照組和NASH模型組分別經(jīng)小鼠尾靜脈注

3、射生理鹽水，注射劑量均為0.5μg/（kg·d），連續(xù)注射14天，在隔夜禁食12小時(shí)后，測量小鼠體重；內(nèi)眥靜脈取血，離心取血清，測定丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（alanine aminotransferase，ALT）、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（aspartate transaminase，AST）、甘油三酯（triglyceride，TG）的水平；ELISA法及放射免疫法測炎性因子白介素-1β（interleukin-1β，IL-1β）、白介素-6（

4、interleukin-6，IL-6）和腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）的水平；處死小鼠，觀察肝臟形態(tài)并測量肝濕重，計(jì)算肝指數(shù)；取部分中葉肝組織進(jìn)行蘇木精-伊紅染色(hematoxylin and eosin staining，HE)染色，顯微鏡下觀察其病理變化并選用NAFLD活動(dòng)度積分(NAFLD activity score，NAS）評(píng)分；使用凱基全蛋白提取試劑盒進(jìn)行肝臟組織全蛋白的提取

5、，ELISA法測ER stress相關(guān)蛋白即葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78（glucose regulated protein78，GRP78）和C/EBP同源蛋白（C/EBP homologous protein，CHOP）的水平。
　　結(jié)果：⑴成功制造NASH小鼠模型；⑵NASH模型組體重及肝指數(shù)與正常對(duì)照組相比升高明顯（P<0.05）；⑶NASH模型組小鼠的ALT、AST、IL-6、IL-1β及TNF-α水平均明顯高于正常對(duì)照組（P<0

6、.05），HGF組比NASH模型組明顯降低（P<0.05）；⑷NASH模型組的TG水平較正常對(duì)照組明顯升高（P<0.05），HGF組高于NASH模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；⑸組織學(xué)變化：正常對(duì)照組小鼠肝組織的HE染色切片可見清晰的肝臟小葉結(jié)構(gòu)，肝細(xì)胞與肝血竇并行呈放射樣整齊排列，未見脂滴和炎細(xì)胞，NASH模型組的小葉結(jié)構(gòu)紊亂，肝細(xì)胞排列無序，可見大量脂滴和炎細(xì)胞浸潤；HGF組較NASH模型組的病理改變減輕；⑹ELISA法測