CMKLR1基因缺失對雙氫睪酮誘導雄性小鼠骨形成的影響.pdf

1、骨質疏松癥（Osteoporosis）是一種常見的骨代謝性疾病，隨著社會的老齡化，該病的患病率正日益上升，嚴重影響著人類的健康。由于老年男性骨質疏松發(fā)病率的提高，雄激素對骨的作用機制成為人們關注的熱點。成骨細胞、破骨細胞、骨細胞、骨髓間充質干細胞表面均有雄激素受體，雄激素對成骨細胞的調控是直接通過成骨細胞上的雄激素受體實現(xiàn)的。骨髓間充質干細胞(Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells，BMSCs)是可以向不同

2、類型的細胞發(fā)生轉化的，其轉化命運由細胞外信號分子調控。其中，細胞因子Chemerin其受體之一CMKLR1能夠介導免疫、炎癥、代謝、生殖及癌癥方面的疾病。Chemerin與其受體CMKLR1協(xié)調作用可以促進骨髓間充質干細胞向脂肪細胞轉化，而CMKLR1介導的信號通路在骨形成中的作用至今沒有報道，本文主要闡釋了雙氫睪酮與CMKLR1信號通路對骨形成的影響。
　　為了闡明DHT/CMKLR1信號通路對小鼠體骨髓間充質干細胞分化能力的影

3、響以及對小鼠骨組織代謝的影響，本課題主要從體內試驗和體外試驗進行了探究。對于體內試驗，我們對出生25天的C57雌鼠進行了分組，分為對照組、DHT組和DHT＋α-NETA組，每組5只，處理21天后取股骨和脛骨進行骨組織micro-CT掃描分析，檢測骨礦物質密度、骨小梁數(shù)和骨體積分數(shù)；用熒光定量的方法檢測骨形成相關因子ALP、Runx2和Col1a2的表達，探究CMKLR1被拮抗后DHT對骨代謝的調控。對于體外試驗主要是分離培養(yǎng)CMKLR1

4、基因敲除鼠和野生型雄鼠的BMSCs，在DHT的誘導下觀察BMSCs的成骨分化能力。并通過在野生型小鼠的BMSCs中添加CMKLR1的拮抗劑α-NETA及通過瞬時轉染CMKLR1 siRNA來沉默CMKLR1，降低CMKLR1與Chemerin的結合，觀察BMSCs的分化，通過堿性磷酸酶染色的方法檢測ALP的活性，通過茜素紅染色的方法檢測鈣結節(jié)的形成情況，通過熒光定量的方法檢測成骨相關基因ALP、Runx2和Osterix表達的變化，用W

5、estern blot的方法檢測Runx蛋白的變化。結果表明，在體內試驗中DHT增加了骨密度、骨小梁數(shù)和骨體積分數(shù)，骨形成相關因子ALP、Runx2和Col1a2的表達也都上調；注射α-NETA后，各項指標都有所下降。體外培養(yǎng)誘導BMSCs的試驗也顯示，CMKLR1缺失后堿性磷酸酶的活性降低，鈣結節(jié)形成減少，成骨相關基因的表達和Runx2蛋白都下調。因此，DHT可以促進骨髓間充質干細胞向成骨細胞分化，并促進成骨細胞的礦化，CMKLR1基