南極磷蝦(Euphausia superba)抑菌活性肽的初步純化及其作用機(jī)理研究.pdf

1、南極磷蝦(Euphausiasuperba)是南極生態(tài)系統(tǒng)的關(guān)鍵物種,不但資源巨大,而且營養(yǎng)價(jià)值豐富具有高蛋白、低脂肪等特點(diǎn),因而對(duì)該資源其高值化利用具有重要意義。
　　 本文以南極磷蝦為研究對(duì)象,通過雙酶酶解制備南極磷蝦抑菌活性肽混合物,并對(duì)酶解工藝條件進(jìn)行優(yōu)化;采用Labscale小型切向流超濾系統(tǒng)、MSC300超濾杯和CM-52CarboxymethylCellulose陽離子交換層析對(duì)南極磷蝦抑菌活性肽混合物進(jìn)行初步純化

2、,并探討了其抑菌機(jī)理。主要研究結(jié)論如下:
　　 1、南極磷蝦蛋白酶解物對(duì)金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)具有明顯的生長抑制作用,最佳酶解工藝為中性蛋白酶和胰蛋白酶雙酶水解,最適pH7.5,溫度52.5℃,水解時(shí)間3h,雙酶加酶量之比為2:5(W:W),雙酶添加量為3000U/g底物。
　　 2、南極磷蝦抑菌活性肽混合物經(jīng)超濾、弱陽離子交換層析純化后最終得到一個(gè)分子量范圍在254～709D的混合肽

3、(命名為CMCC-1),其最低抑菌濃度(MIC)為5mg/mL。
　　 3、抑菌機(jī)理研究結(jié)果表明:①CMCC-1在對(duì)數(shù)生長期能抑制會(huì)黃色葡萄球菌的菌體分裂;②培養(yǎng)液中蛋白和還原糖含量提高、電導(dǎo)率增加,且能檢測(cè)到堿性磷酸酶和β-半乳糖苷酶的活性,說明菌體細(xì)胞壁和細(xì)胞膜可能被破壞,致使菌體通透性增強(qiáng),大量胞內(nèi)物質(zhì)外泄;③經(jīng)過掃描電鏡對(duì)金黃色葡萄球菌菌體形態(tài)結(jié)構(gòu)觀察發(fā)現(xiàn),隨著CMCC-1處理時(shí)間的延長,加樣組金黃色葡萄球菌菌體細(xì)胞形狀

4、變得不規(guī)則,菌體細(xì)胞表面粗糙,體積變小,大量的菌體細(xì)胞粘連在一起,大量胞內(nèi)物質(zhì)外溢,細(xì)胞之間的界限變得模糊不清,幾乎融合為一個(gè)整體;④透射電鏡下觀察到,經(jīng)CMCC-1處理后,金黃色葡萄球菌菌體表面變粗糙,細(xì)菌的繁殖能力受到抑制,菌體細(xì)胞壁變薄、細(xì)胞質(zhì)固縮,內(nèi)部空腔變大,菌體內(nèi)含物大量外泄,不規(guī)則地分布在破碎菌體周圍,菌體細(xì)胞最終裂解、死亡;⑤經(jīng)SDS-PAGE分析,CMCC-1可導(dǎo)致菌體全蛋白譜帶中部分譜帶的缺失,剩余蛋白譜帶也隨著CM