矢車菊素-3-O-葡萄糖苷對重金屬鎘暴露的R2C細(xì)胞損傷的干預(yù)作用研究.pdf

1、SichuanAgriculturalUniversityMaster’SDegreeDissertationStudyontheinterventionofcyanidin3OglucosideonthereproductionpoisonofheavymetalCdinR2CcellsByJunliLuDirectedbyProfessorYangYongMajor：FoodScienceandEngineeringMay2016摘

2、要通過體外實驗，建立重金屬Cd的雄性生殖損傷模型，然后再探索矢車菊素一3O葡萄糖苷(C3G)對重金屬Cd引起雄性生殖毒性的干預(yù)作用以及具體機制，為矢車菊素3O葡萄糖苷營養(yǎng)功能的開發(fā)及利用食源性功能成分提供理論依據(jù)。本實驗選用MTT的方法，確定CdSO。對R2C細(xì)胞的半抑制作用濃度：通過MTT方法檢測不同濃度C3G對重金屬Cd暴露的R2C增殖能力的影響，并確定C3G的作用濃度；熒光顯微鏡觀察C3G對重金屬Cd暴露的R2C細(xì)胞形態(tài)的作用；化

3、學(xué)發(fā)光法(chemiluminescence。CL)檢測細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生ROS水平變化：流式細(xì)胞術(shù)(flowcytomet巧，F(xiàn)CM)檢測R2C細(xì)胞線粒體膜電位的變化：Westernblot測定C3G與Cd刺激后R2C細(xì)胞內(nèi)與孕酮合成相關(guān)以及抗氧化相關(guān)蛋白的表達(dá)量：放射免疫法(radioimmunoassav，RIA)測定R2C細(xì)胞孕酮合成功能的變化，結(jié)果如下：重金屬Cd可以抑制R2C的增殖，且半抑制作用濃度IC50為(4480士00479)

4、gmol／L。C3G可以抑制重金屬Cd暴露的R2C細(xì)胞增殖能力的下降，且在濃度在5～80pmol／L之間時有劑量依賴關(guān)系。熒光顯微鏡觀察結(jié)果表明，Cd可以影響R2C細(xì)胞形態(tài)，Cd作用24h，細(xì)胞變亮、變圓、體積變小，而C3G可以改善重金屬Cd對R2C造成的形態(tài)的損傷。ROS檢測結(jié)果表明，重金屬Cd可以提高R2C細(xì)胞中ROS的產(chǎn)生，且ROS產(chǎn)生量會隨時間的延長而增加，而C3G可以抑制重金屬Cd暴露的R2C細(xì)胞ROS的產(chǎn)生，不會隨時間的延長

5、而增加。流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果表明，重金屬Cd可以顯著提高線粒體損傷，C3G可以對重金屬Cd暴露的R2C細(xì)胞線粒體的損傷起到一定的抑制作用。WesternBlot結(jié)果表明，只加入重金屬Cd的損傷組細(xì)胞，孕酮合成通路關(guān)鍵蛋白StAR蛋白表達(dá)量下降，與損傷組相比，C3G預(yù)保護(hù)組R2C細(xì)胞StAR蛋白表達(dá)量有所提高；同時也檢測了抗氧化相關(guān)蛋白SOD2的表達(dá)情況，與正常組相比，重金屬Cd損傷組R2C細(xì)胞SOD2蛋白表達(dá)量顯著上調(diào)，而加入花色苷后，S