徐聞3種石珊瑚共附生可培養(yǎng)真菌多樣性及其抗菌活性的研究.pdf

1、珊瑚具有顯著的生物多樣性，從中分離到多種生物活性物質(zhì)。海洋真菌往往能產(chǎn)生與陸地真菌不同的活性物質(zhì)，研究推測共附生真菌可能是宿主活性物質(zhì)的真正生產(chǎn)者。徐聞是中國大陸架唯一保存最完好的珊瑚自然生長區(qū)。本文從徐聞珊瑚保護(hù)區(qū)中采集3種石珊瑚，通過采用兩種培養(yǎng)基分離珊瑚上共附生真菌，結(jié)合形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)方法進(jìn)行鑒定，比較不同珊瑚上海洋真菌的分布和種屬特征，采用瓊脂擴(kuò)散法對珊瑚共附生真菌的抗菌活性進(jìn)行初步篩選。
　　從3種珊瑚上共分離到54

2、株真菌，其中普哥濱珊瑚上分離到23株，扁縮濱珊瑚上分離到21株，牡丹珊瑚上分離到10株。青霉屬Penicillium sp.、曲霉屬 Aspergillussp.數(shù)量最多，在3個(gè)樣品上均有分布，分別占菌株總數(shù)的18.52％和29.63％。從各樣品珊瑚共附生真菌的分布看，濱珊瑚上青霉屬和曲霉屬為優(yōu)勢種屬，牡丹珊瑚曲霉屬和肉座菌屬為優(yōu)勢種屬。
　　結(jié)合ITS-rDNA基因序列的系統(tǒng)發(fā)育分析對珊瑚共附生可培養(yǎng)真菌多樣性進(jìn)行研究，將54株

3、真菌的ITS-rDNA序列，與NCBI數(shù)據(jù)庫GenBank中的序列進(jìn)行相似性比較并構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹。結(jié)果表明，53株真菌分屬于15個(gè)屬，青霉屬Penicillium sp.、曲霉屬 Aspergillus sp.為優(yōu)勢菌屬，另外還有少量Gibberella sp.、Tritirachium sp.、Hypocreaceae sp.、Basidiomycete sp.、Cochliobolus sp.、Didymellaceae sp.、E

4、utypella sp.、Lentinus squarrosulus、Nectria ipomoeae、Rigidoporus vinctus。另有編號C1-23的菌株相似率僅為90％，可能是一株新種。濱珊瑚多樣性指數(shù)較高，菌株數(shù)量和種類較豐富，但普哥濱珊瑚上菌株在個(gè)別種屬上集中，不及扁縮濱珊瑚的菌株分布均勻，牡丹珊瑚上菌株數(shù)量及種類均不及濱珊瑚，但種屬的個(gè)體數(shù)量接近，均勻度也較好。
　　經(jīng)初步提取濃縮，將54株菌的發(fā)酵粗提取物進(jìn)

5、行抗菌實(shí)驗(yàn)和最小抑菌濃度實(shí)驗(yàn)。經(jīng)過初篩有13株珊瑚真菌至少對一種指示菌表現(xiàn)出抗性，占菌株總數(shù)的24.07％，6株活性真菌來源于1號樣品，4株來源于2號，3株來源于3號樣品。13株菌分屬于6個(gè)屬，其中曲霉屬和赤霉屬各4株，數(shù)量最多，共占菌株總數(shù)的14.81％，2株為Hypocreaceae sp.，還有頂枝孢屬、白色念珠菌和射脈菌屬各1株。選擇這13株菌經(jīng)過兩種培養(yǎng)基發(fā)酵，用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇浸提的粗提物進(jìn)行抑菌活性實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)乙酸乙

6、酯和正丁醇粗提物抑菌活性較其他有機(jī)試劑提取活性好，C1-2，C1-10，C1-15經(jīng)兩種培養(yǎng)基發(fā)酵后的粗提物都具有良好的抑菌活性，針對某些指示菌的抑菌能力強(qiáng)。選擇6株抑菌能力較強(qiáng)的菌株進(jìn)行最小抑菌濃度的測試。珊瑚共生真菌對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌抑菌作用最強(qiáng)，曲霉屬和頂枝孢屬真菌的抑菌活性較好，但是同屬的菌株間抑菌能力不同。
　　研究結(jié)果表明，石珊瑚上存在大量海洋真菌，種類豐富，而不同的珊瑚上真菌種群不同，而濱珊瑚種群多樣性豐富，