壬基酚對雌性SD大鼠免疫系統(tǒng)功能影響的研究.pdf

1、目的:壬基酚(nonylphenol，NP)，又稱壬基苯酚，常溫下為無色或淡黃色液體，略帶苯酚氣味，幾乎不溶于水，溶于丙酮，是一種重要的精細(xì)化工原料和中間體，主要用于生產(chǎn)表面活性劑、也用于抗氧劑、紡織印染助劑、潤滑油添加劑、農(nóng)藥乳化劑、樹脂改性劑、樹脂及橡膠穩(wěn)定劑等領(lǐng)域。NP是有代表性的環(huán)境內(nèi)分泌干擾物，其對生物體產(chǎn)生的不良作用包括影響內(nèi)分泌、影響生殖和發(fā)育、影響免疫及促癌作用等。目前，國內(nèi)外對壬基酚毒性作用的研究主要集中于探討其對生殖

2、系統(tǒng)造成的損傷及其機制，而關(guān)于壬基酚對免疫系統(tǒng)毒性影響方面的研究較少，且尚無壬基酚對生殖免疫影響的報道。本課題通過研究壬基酚慢性染毒對雌性SD大鼠脾臟、胸腺組織及其淋巴細(xì)胞的損傷作用，并同時檢測大鼠血清IFN-γ、IL-4含量和脾臟、胸腺、外周血NK、NKT細(xì)胞水平，探討壬基酚對雌性大鼠免疫系統(tǒng)功能的影響，并初步探討壬基酚致機體免疫系統(tǒng)功能損傷的可能機理，為進一步探索壬基酚致機體免疫損傷的機制提供科學(xué)依據(jù)。
　　 方法:選用32

3、只健康8～9周齡SPF級雌性SD大鼠，適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后，按體重隨機分為溶劑對照組（玉米油）和低（20mg/kg）、中（80mg/kg）、高(200mg/kg)劑量壬基酚染毒組，每組8只。采用灌胃方式進行染毒，灌胃容量5ml/kg，隔天染毒1次，連續(xù)60d。(1)體重和一般情況觀察隔天稱1次體重，密切觀察各組動物的一般狀況變化，如被毛、糞便、行為、精神狀態(tài)等;(2)大鼠處死后，腹主動脈采血，2h內(nèi)進行動態(tài)血常規(guī)檢測，觀察外周血血液參數(shù)改變

4、;(3)蘇木精-伊紅(HematoxylinandEosin，HE)染色，觀察各組間胸腺、脾臟組織病理學(xué)改變;(4)腹主動脈取血，離心分離血清，采用酶聯(lián)免疫間接法測定大鼠血清IFN-γ、IL-4的相對含量;(5)用熒光標(biāo)記的抗體進行染色，流式細(xì)胞儀檢測胸腺、脾臟、外周血NK、NKT細(xì)胞含量;(6)采用流式細(xì)胞術(shù)，通過相應(yīng)的熒光探針檢測不同濃度NP處理組大鼠脾臟、胸腺淋巴細(xì)胞內(nèi)活性氧(ROS)（用熒光探針DCFH2DA）、游離鈣離子([C

5、a2+]i)濃度（用熒光探針Fluo-3AM）、線粒體膜電位(MMP)（用熒光探針JC-1）水平的變化;(7)采用流式細(xì)胞儀，通過碘化丙啶(PI)染色觀察不同NP染毒組間脾臟、胸腺淋巴細(xì)胞細(xì)胞周期和凋亡率的變化。
　　 結(jié)果:(1)隨NP染毒劑量增加，大鼠體重呈下降趨勢，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，存在劑量-效應(yīng)關(guān)系（r=-0.532，P＜0.05）;與溶劑對照組比較，高劑量NP染毒組大鼠的胸腺、脾臟重量下降明顯，而中、低

6、劑量組胸腺、脾臟重量無明顯變化;但各組大鼠胸腺、脾臟系數(shù)間比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義;(2)血液學(xué)指標(biāo)檢測結(jié)果顯示，與對照組比較，高濃度NP染毒組大鼠外周血白細(xì)胞數(shù)、中性粒細(xì)胞計數(shù)、淋巴細(xì)胞計數(shù)、中性粒細(xì)胞比率明顯升高，淋巴細(xì)胞比率、嗜酸性粒細(xì)胞比率明顯降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);各組大鼠外周血紅細(xì)胞計數(shù)、血小板計數(shù)無明顯變化;高濃度NP染毒組血紅蛋白含量略高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）;(3)病理學(xué)檢查可見，與對

7、照組相比，中、高劑量壬基酚染毒組脾臟白髓減少，脾竇內(nèi)血管擴張充血。各組胸腺均未見明顯病理改變;(4)流式細(xì)胞術(shù)檢測結(jié)果顯示，隨NP染毒劑量增加，外周血中NK、NKT細(xì)胞呈上升趨勢，與對照組相比，高劑量染毒組外周血NK、NKT細(xì)胞含量升高明顯，有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);各組間胸腺、脾臟NK、NKT細(xì)胞水平無明顯變化;(5)與對照組相比，高劑量組大鼠的血清IFN-γ、IL-4含量明顯減少(P＜0.05)，而低劑量組和中劑量組均無明顯變化

8、（P＞0.05）。各組間IFN-γ/IL-4無明顯改變;(6)流式細(xì)胞術(shù)檢測結(jié)果顯示，與溶劑對照組相比，中、高劑量壬基酚染毒組大鼠脾淋巴細(xì)胞內(nèi)ROS水平和高劑量壬基酚染毒組脾淋巴細(xì)胞內(nèi)[Ca2+]i水平明顯升高，高劑量壬基酚染毒組脾淋巴細(xì)胞內(nèi)MMP水平明顯降低，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），且脾淋巴細(xì)胞內(nèi)ROS、[Ca2+]i水平與壬基酚濃度呈正相關(guān)(ROS:r=0.488，P＜0.05;[Ca2+]i:r=0.497，P＜0.0

9、5)，MMP水平與壬基酚濃度呈負(fù)相關(guān)（r=-0.565，P＜0.05）。高劑量壬基酚染毒組胸腺淋巴細(xì)胞內(nèi)ROS水平升高明顯(P＜0.05)，[Ca2+]i、MMP水平無明顯變化;(7)PI標(biāo)記顯示，壬基酚處理后細(xì)胞周期未見明顯變化，各期未見明顯細(xì)胞阻滯;隨NP染毒劑量增加，脾臟、胸腺淋巴細(xì)胞凋亡率呈上升趨勢，NP染毒劑量與細(xì)胞凋亡之間存在劑量一效應(yīng)關(guān)系。
　　 結(jié)論:(1)NP暴露可使大鼠胸腺、脾臟重量明顯下降，且存在劑量-效應(yīng)

10、關(guān)系，提示NP能影響大鼠免疫器官的生長發(fā)育;(2)NP暴露可嚴(yán)重影響大鼠血液學(xué)參數(shù)，對血液系統(tǒng)具有一定毒性;(3)病理學(xué)檢查提示NP對脾臟具有一定的損傷作用，可能影響其功能;(4)NP暴露可使大鼠血清IFN-γ、IL-4含量明顯降低，且存在劑量-效應(yīng)關(guān)系。NP亦可影響外周血中NK、NKT細(xì)胞水平，提示NP可影響免疫系統(tǒng)功能，具有一定的免疫毒性;(5)NP暴露可影響大鼠胸腺、脾淋巴細(xì)胞內(nèi)ROS、[Ca2+]i、MMP水平，且存在劑量效應(yīng)關(guān)