磁性殼聚糖微球固定化(S)-立體專一酰胺酶的研究.pdf

1、哌嗪-2-羧酸作為非蛋白組成成分的氨基酸,是重要的手性藥物中間體,其不同的單一對映體(S型和R型)衍生物具有不同的藥理活性。本實驗室篩選得到的副球菌(Paracoccous sp.) W10173產(chǎn)生的(S)-酰胺酶能夠立體選擇性水解(S)-哌嗪-2-甲酰胺生成重要醫(yī)藥中間體(S)-哌嗪-2-羧酸的單一對映體。由于固定化酶與游離酶相比具有便于回收、穩(wěn)定性高、操作連續(xù)可控、工藝簡便等一系列的優(yōu)點,故對(S)-酰胺酶進行固定化研究對其應用于

2、工業(yè)生產(chǎn)有重要意義。
　　本研究首先對實驗室保藏的副球菌W10173經(jīng)超聲波破壁和分級鹽析得到實驗用粗酶。超聲波破壁條件為功率400W,工作時間3S,間歇時間6S,循環(huán)240次;并確定分級鹽析的最佳硫酸銨飽和度為20％-50%,且重復三次。
　　以化學共沉淀法制備的Fe3O4磁性粒子為磁核,液體石蠟為分散介質(zhì),Span-80為乳化劑,戊二醛為交聯(lián)劑,采用反相懸浮交聯(lián)法合成磁性殼聚糖微球。以此為載體,通過吸附-交聯(lián)聯(lián)合固定化方

3、法制備固定化(S)-酰胺酶,并探討了酶給予量、吸附時間、交聯(lián)時間、戊二醛濃度等因素對固定化效果的影響。最終確定(S)-酰胺酶的最佳固定條件為:10mL0.95mg/mL粗酶液/50mg載體吸附2h、戊二醛濃度1%交聯(lián)4.5h。
　　對固定化(S)-酰胺酶酶學性質(zhì)進行研究結(jié)果表明,固定化(S)-酰胺酶的最佳溫度為32℃;最佳pH為11,比游離酶最佳pH向堿性移動2個單位。同時還發(fā)現(xiàn)該固定化酶具有良好的熱穩(wěn)定性,60℃處理4h后仍能保