09t-i660-01細菌內毒素檢查法(一部)檢驗標準操作規(guī)程

1、1.目的：目的：建立細菌內毒素檢查法(一部)檢驗標準操作規(guī)程，并按規(guī)程進行檢驗，保證檢驗操作規(guī)范化。2.依據：依據：2.1.《中華人民共和國藥典》2010年版一部。3.范圍范圍：適用于所有用細菌內毒素檢查法(一部)測定的供試品。4.責任責任：檢驗員、質量控制科主任、質量管理部經理對本規(guī)程負責。5.正文：正文：5.1.本法系利用鱟試劑來檢測或量化由革蘭陰性菌產生的細菌內毒素，以判斷供試品中細菌內毒素的限量是否符合規(guī)定的一種方法。5.1.1

2、.細菌內毒素檢查包括兩種方法，即凝膠法和光度測定法，后者包括濁度法和顯色基質法。供試品檢測時，可使用其中任何一種方法進行試驗。當測定結果有爭議時，除另有規(guī)定外，以凝膠法結果為準。本試驗操作過程應防止微生物和內毒素的污染。5.1.2.細菌內毒素的量用內毒素單位(EU)表示，1EU與1個內毒素國際單位（IU）相當。5.1.3.細菌內毒素國家標準品系自大腸埃希菌提取精制而成。用于標定、復核、仲裁鱟試劑靈敏度和標定細菌內毒素工作標準品的效價。5

3、.1.4.細菌內毒素工作標準品系以細菌內毒素國家標準品為基準標定其效價，用于試驗中鱟試劑靈敏度復核、干擾試驗及各種陽性對照。5.1.5.凝膠法細菌內毒素檢查用水系指內毒素含量小于0.015EUml（用于凝膠法）或0.005EUml（用于光度測定法）且對內毒素試驗無干擾作用的滅菌注射用水。5.4.2.C為供試品溶液的濃度，當L以EUml表示時，則C等于1.0mlml，當L以EUmg或EUU表示時，C的單位需為mgml或Uml。如供試品為注

4、射用無菌粉末或原料藥，則MVD取1，可計算供試品的最小有效稀釋濃度C=λL；5.4.3.λ為在凝膠法中鱟試劑的標示靈敏度（EUml），或是在光度測定法中所使用的標準曲線上最低的內毒素濃度。5.5.方法1：凝膠法。5.5.1.凝膠法系通過鱟試劑與內毒素產生凝集反應的原理來檢測或半定量內毒素的方法。5.5.2.鱟試劑靈敏度復核試驗：在本檢查法規(guī)定的條件下，使鱟試劑產生凝集的內毒素的最低濃度即為鱟試劑的標示靈敏度，用EUml表示。當使用新批號

5、的鱟試劑或試驗條件發(fā)生了任何可能影響檢驗結果的改變時，應進行鱟試劑靈敏度復核試驗。5.5.3.根據鱟試劑靈敏度的標示值(λ)將細菌內毒素國家標準品或細菌內毒素工作標準品用細菌內毒素檢查用水溶解，在旋渦混合器上混合15分鐘，然后制成2.0λ、λ、0.5λ和0.25λ四個濃度的內毒素標準溶液，每稀釋一步均應在旋渦混合器上混勻30秒鐘。取分裝有0.1ml鱟試劑溶液的10mm75mm試管或復溶后的0.1ml支規(guī)格的鱟試劑原安瓿18支，其中16管

6、分別加入0.lml不同濃度的內毒素標準溶液，每一個內毒素濃度平行做4管；另外2管加入0.1ml細菌內毒素檢查用水作為陰性對照。將試管中溶液輕輕混勻后，封閉管口，垂直放入37℃1℃的恒溫器中，保溫60分鐘2分鐘。5.5.4.將試管從恒溫器中輕輕取出，緩緩倒轉180，若管內形成凝膠，并且凝膠不變形、不從管壁滑脫者為陰性；未形成凝膠或形成的凝膠不堅實、變形并從管壁滑脫者為陰性。保溫和拿取試管過程應避免受到振動造成假陰性結果。5.5.5.當最大