免疫球蛋白檢測ppt課件

1、1,第十七章 免疫球蛋白檢測,2,概念免疫球蛋白（immunoglobulin，Ig）：是由漿細(xì)胞合成和 分泌的一組具有抗體活性、化學(xué)結(jié)構(gòu)與抗體相似的蛋白質(zhì)Ig主要存在于血液中，約占血漿蛋白總量的20%，也可存 在于尿液，腦脊液等體液及外分泌液中Ig含量：血清 IgG、IgA、IgM：g/L， IgD、IgE：mg/L 體液 IgG、IgA、IgM：mg

2、/L 檢測意義：反應(yīng)機(jī)體的免疫功能、免疫缺陷病、自身免疫病、免疫增殖性疾病的診斷和治療,3,一、免疫球蛋白的異質(zhì)性（一）免疫球蛋白的類型（二）免疫球蛋白的多樣性（三）免疫球蛋白的血清型二、免疫球蛋白的功能,第一節(jié) 免疫球蛋白的生物學(xué)功能,4,免疫球蛋白的基本結(jié)構(gòu),四肽鏈分子，即由兩條相同的重鏈和兩條相同的輕鏈通過鏈間二硫鍵連接而成的免疫球蛋白單體，呈“Y”字形。,,5,可變區(qū)和恒定區(qū)：氨基酸序列變化,6,可變區(qū)（varia

3、ble region，V區(qū)）：位于免疫球蛋白分子N端的氨基酸組成和排列有較大差異（占輕鏈1/2和重鏈1/4或1/5） ，決定抗體與抗原結(jié)合的特異性。恒定區(qū)（constant region，C區(qū))：位于免疫球蛋白分子的C端的氨基酸組成和排列比較恒定（占輕鏈1/2和重鏈3/4或4/5） ，介導(dǎo)免疫球蛋白多種生物學(xué)功能。鉸 鏈 區(qū)：位于CH1和CH2之間，含豐富的脯氨酸，易伸展彎曲，有利于免疫球蛋白V區(qū)與抗原互補(bǔ)性結(jié)合，有利于暴露補(bǔ)體

4、結(jié)合位點(diǎn)；連接免疫球蛋白Fab段和Fc段，易被木瓜蛋白酶和胃蛋白酶水解。,7,高變區(qū)（hypervariable region, HVR）：在VL和VH中各有三個(gè)區(qū)域的氨基酸組成和排列順序特別易變化，分別用HVR1，HVR2， HVR3表示?；パa(bǔ)決定區(qū)（complementarity-determining region, CDR）：高變區(qū)是抗體與抗原（表位）特異性結(jié)合的位置，所以又稱為CDR。高變區(qū)=互補(bǔ)決定區(qū)骨架區(qū)（fram

5、ework region, FR）： V區(qū)中非HVR部位的氨基酸組成和排列相對保守，此為FR。VH和VL各有4個(gè)FR。,8,本文由探生科技技術(shù)人員提供,Fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!,,恒定區(qū),,可變區(qū),,高變區(qū),,骨架區(qū),9,本文由探生科技技術(shù)人員提供,Fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!,10,類（class）：根據(jù)CH不同Ig分5類： IgG(γ)、I

6、gA(α)、IgM(μ)、IgD(δ)、IgE(ε) 亞類：IgG1-G4； IgA1-A2； IgM1-M2。型（type）：根據(jù)CL不同Ig分為兩個(gè)型： κ型和λ型 亞型： λ型有λ1、λ2、λ3、λ4四個(gè)亞型,一、免疫球蛋白的異質(zhì)性（一）免疫球蛋白的類型,11,12,（二）免疫球蛋白的多樣性,13,多樣性抗原的存在是導(dǎo)致免疫球蛋白異質(zhì)性（即特異性）的外源因素

7、，是免疫球蛋白異質(zhì)性的物質(zhì)基礎(chǔ)?？贵w的這種異質(zhì)性，反應(yīng)機(jī)體對抗原精細(xì)結(jié)構(gòu)的識別和應(yīng)答。,14,（三）免疫球蛋白的血清型 ——內(nèi)源性因素所致免疫球蛋白異質(zhì)性免疫球蛋白既可與相應(yīng)的抗原發(fā)生特異性結(jié)合，本身又可作為抗原，激發(fā)機(jī)體產(chǎn)生特異性免疫應(yīng)答。免疫球蛋白有3種不同的血清型 (1)同種型 (2)同種異型 (3)獨(dú)特型,15,免疫球蛋白的雙重身份,16,同種型（isotype）指同一種屬所有個(gè)體的免疫球蛋白分子共有的抗

8、原特異性標(biāo)志，位于免疫球蛋白C區(qū)。為種屬標(biāo)志 （顏色不一樣）,17,同種異型（allotype） 指同一種屬但不同個(gè)體來源的免疫球蛋白C區(qū)分子所具有的不同的抗原特異性標(biāo)志。為個(gè)體標(biāo)志 （花紋不一樣）,18,獨(dú)特型（idiotype） 即使是同一種屬、同一個(gè)體來源的免疫球蛋白分子，其免疫原性亦不盡相同，稱為獨(dú)特型，其決定簇又稱為獨(dú)特位，主要存在 于免疫球蛋白V區(qū)。,19,20,二、免疫球蛋白的功能,免疫球蛋白V區(qū)的功

9、能： 特異性識別結(jié)合抗原（主要功能） 抗原結(jié)合價(jià)：免疫球蛋白結(jié)合抗原表位的個(gè)數(shù) 單體免疫球蛋白可結(jié)合2個(gè)抗原表位，為雙價(jià)；分泌型IgA為4價(jià)五聚體IgM由于立體構(gòu)型的空間位阻，一般只能結(jié)合五個(gè)抗原表位，為5價(jià),21,免疫球蛋白的V區(qū)特異性識別結(jié)合抗原后，在體內(nèi)可結(jié)合病原微生物及其產(chǎn)物，發(fā)揮以下作用： （1）中和毒素 （2）阻斷病原體入侵 （3）清除病原微生物 （4）構(gòu)成B細(xì)胞的抗原識別受體,特異性識別

10、結(jié)合抗原,22,本文由探生科技技術(shù)人員提供,Fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!,中和毒素,23,本文由探生科技技術(shù)人員提供,Fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!,阻止病毒入侵,24,本文由探生科技技術(shù)人員提供,Fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!,阻止細(xì)菌入侵,25,免疫球蛋白C區(qū)的功能：（1）激活補(bǔ)體 IgM、IgG1~3 ? 激活補(bǔ)體經(jīng)典途徑

11、 凝聚的IgA或IgG4 ? 激活補(bǔ)體旁路途徑（2）細(xì)胞親嗜性(與細(xì)胞表面FcR結(jié)合) ① 調(diào)理作用（opsonization)； IgFc段與吞噬細(xì)胞表面FcR結(jié)合?促吞噬； ②抗體依賴的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用 （Ab-dependent cell-mediated cytotoxicity,ADCC)

12、 ③介導(dǎo)I型超敏反應(yīng)（3）IgG穿過胎盤 ——被動(dòng)免疫、（4） sIgA通過呼吸道和消化道粘膜 ——粘膜局部免疫,26,抗體依賴的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用,28,29,IgG是血清中含量最高的免疫球蛋白，是血液和細(xì)胞外液中的主要抗體，也是機(jī)體再次免疫的主要抗體。出生后3個(gè)月開始合成，3-5歲接近成人水平，是唯一能通過胎盤的Ig IgM為五聚體，是分子量最大的免疫球蛋白，稱為巨球蛋白（macroglobulin）；是個(gè)體

13、發(fā)育過程中最早合成和分泌的抗體，也是抗原刺激誘導(dǎo)的體液免疫應(yīng)答中最早出現(xiàn)的抗體；主要存在于血液中，是血管內(nèi)抗感染的主要抗體。,各類免疫球蛋白的特性和功能,30,各類免疫球蛋白的特性和功能,IgA分為血清型和分泌型，是參與黏膜局部免疫的主要抗體，主要存在于胃腸道和支氣管分泌液、初乳、唾液和淚液中。初乳中的sIgA可對嬰幼兒發(fā)揮自然被動(dòng)免疫作用正常人血清中IgD含量很低，膜結(jié)合型IgD(mIgD)構(gòu)成BCR，是B細(xì)胞分化發(fā)育成熟的標(biāo)志。

14、 IgE是正常人血清中含量最少的免疫球蛋白，主要由黏膜下淋巴組織中的漿細(xì)胞分泌，為親細(xì)胞抗體，引起I型超敏反應(yīng)；與機(jī)體抗寄生蟲免疫也可能有關(guān)。,31,單克隆抗體和多克隆抗體多克隆抗體（polyclonal antibody）：用含多種抗原決定簇的抗原物質(zhì)免疫動(dòng)物，刺激多個(gè)B細(xì)胞克隆所獲得的免疫血清（含多種抗體的混合物），此為多克隆抗體。 來源廣泛，制備容易；特異性不高。單克隆抗體（monoclonal antib

15、ody, mAb）由一個(gè)識別一種抗原表位的B細(xì)胞克隆產(chǎn)生的同源抗體 純度高、特異性強(qiáng)、可大量生產(chǎn)。,32,第二節(jié) IgG、IgA、IgM測定方法及臨床意義,一、血液IgG、IgA、IgM測定方法及臨床意義二、血液IgG亞類測定方法及臨床意義三 、尿液免疫球蛋白測定方法及臨床意義四、腦脊液免疫球蛋白測定方法及臨床意義,33,（一）、測定方法單向免疫擴(kuò)散試驗(yàn) （凝膠內(nèi)免疫沉淀反應(yīng)）酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）：時(shí)間長

16、、批量檢測放射免疫試驗(yàn)（RIA）：放射性核素污染免疫透射比濁試驗(yàn)（液相免疫沉淀反應(yīng)）免疫散射比濁試驗(yàn)（液相免疫沉淀反應(yīng)）免疫固定電泳（IFE）：M蛋白測定,一、血液IgG、IgA、IgM測定方法及臨床意義,34,優(yōu)點(diǎn)：操作簡便、不需特殊耗材缺點(diǎn)：耗時(shí)長、靈敏度低、免疫球蛋白分子量大、沉淀 環(huán)不明顯、導(dǎo)致結(jié)果不準(zhǔn)確，臨床應(yīng)用少,,單向免疫擴(kuò)散試驗(yàn),35,免疫比濁試驗(yàn),原理：第六章免疫沉淀試驗(yàn)和第十四章免疫濁度測

17、定的自動(dòng)化分析常見分類：透射免疫比濁試驗(yàn)：臨床基層單位使用 散射免疫比濁試驗(yàn)（BNP特種蛋白儀) 評價(jià)：散射免疫比濁試驗(yàn)具有檢測范圍寬、時(shí)間短、 測定結(jié)果準(zhǔn)確、精密度高、敏感性高、穩(wěn)定 性好等優(yōu)點(diǎn)，臨床應(yīng)用廣泛。,36,（二）、臨床意義1、年齡,37,2、高Ig血癥： 1）多克隆高Ig血癥（ Ig

18、G、IgA、IgM 均升高）； eg：肝臟疾病，三種均升高 慢性細(xì)菌感染 ， IgG升高 宮內(nèi)感染臍血或新生兒， IgM 升高 自身免疫性疾病 ，三種均升高；SLE、RF 2） 單克隆Ig升高（單一Ig升高）

19、 單克隆蛋白即M蛋白，主要是指患者血清中某一類免疫球蛋 白含量顯著增多，大多在30g/L以上，這種異常增多的免疫 球蛋白理化性質(zhì)十分均一。又稱副蛋白（無免疫活性） eg：免疫增殖病,38,3、 低Ig血癥： 1）先天性低Ig血癥（體液免疫缺陷病和聯(lián)合免疫缺陷病）

20、 a Ig全缺：Bruton型無Ig血癥 b 缺一種或缺兩種Ig ：缺IgA，反復(fù)呼吸道感染 缺IgM，革蘭陰性細(xì)菌敗血癥 缺IgG，化膿性感染 2）獲得性低Ig血癥：大

21、量蛋白丟失 （IgG<5g/L) 淋巴系統(tǒng)腫瘤 重癥傳染病 感染性疾病 長期使用免疫抑制劑,39,Ig亞類：IgG1、

22、IgG2、IgG3、IgG4，其含量依次下降（一）、測定方法： 單向免疫擴(kuò)散試驗(yàn) ：靈敏度低、檢測時(shí)間長酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn) ：抗原特異性較差、檢測時(shí)間長免疫散射比濁試驗(yàn)：檢測速度快、靈敏度高、準(zhǔn)確性好、自動(dòng)化程度高、應(yīng)用廣泛,二、血液IgG亞類測定方法及臨床意義,40,（二）臨床意義： 1、 IgG亞類的含量隨年齡的不同而變化（下表）,41,臨床意義： 2、 IgG亞類缺陷： 定義：當(dāng)某一IgG亞類含

23、量低于年齡對應(yīng)的參考值區(qū)間時(shí) 表現(xiàn)：呼吸道感染、腹瀉、中耳炎、支氣管擴(kuò)張及哮喘等 男女比例：兒童期3:1 , IgG2缺陷常見；成人4;2 IgG1、 IgG3缺陷常見 典型病例：IgA缺乏癥、病毒感染、腎病綜合癥、糖尿病 （注：有些患者IgG亞類異常，但總IgG正常甚至偏高，因此測定IgG亞類更有價(jià)值） 3、 IgG亞類異常增高：I型變態(tài)反應(yīng),42,臨床意義：

24、 4、 IgG4相關(guān)性疾病： 1）定義：是一組以血清IgG4水平升高、受累組織IgG4陽性漿細(xì)胞浸潤及纖維化為特征的疾病；2）該病累及全身多個(gè)組織器官，受累器官出現(xiàn)相應(yīng)的壓迫癥狀和功能障礙，其中胰腺、淚腺、涎腺的受累最為常見；3）類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡： IgG4 自身抗體、 IgG4陽性漿細(xì)胞浸潤。,43,三 、尿液免疫球蛋白測定方法及臨床意義,（一）、測定方法單向免疫擴(kuò)散試驗(yàn) ：靈敏度低、檢測時(shí)間長酶聯(lián)免疫吸

25、附試驗(yàn) ：抗原特異性較差、檢測時(shí)間長免疫散射比濁試驗(yàn)：檢測速度快、靈敏度高、準(zhǔn)確性好、自動(dòng)化程度高、應(yīng)用廣泛,44,（二）、臨床意義：1、免疫球蛋白的檢測 選擇性蛋白尿指數(shù)（SPI)： 評價(jià)腎小球?yàn)V膜受損程度及觀察治療效果和預(yù)后的指標(biāo) 通過測定尿液及血液中轉(zhuǎn)鐵蛋白（TF）及IgG的含量計(jì)算計(jì)算公式： SPI=（尿IgG /血清IgG ）/（尿TRF/血清TRF)SPI≤0.1 腎臟高選擇性排泌分子量較小的蛋白質(zhì)

26、 微小病變型腎病 SPI ≥0.2 腎臟非選擇性排泌分子量較大的蛋白質(zhì) 膜性腎病、膜增殖性腎炎、腎病綜合征,45,根據(jù)尿內(nèi)Ig增高的類型幫助鑒別診斷腎小球疾病的種類,2、游離輕鏈的檢測用于診斷輕鏈病多發(fā)性骨髓瘤等疾病的分型鑒定及預(yù)后判斷,46,四、腦脊液免疫球蛋白測定及臨床意義,（一）測定方法免疫散射比濁試驗(yàn)：腦脊液免疫球蛋白含量低，靈敏度高血腦屏障（BBB)：是指

27、腦毛細(xì)血管壁與神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞形成的血漿與腦細(xì)胞之間的屏障和由脈絡(luò)叢形成的血漿和腦脊液之間的屏障。生理情況下，腦脊液（CSF）中免疫球蛋白的含量：IgG>IgA>IgM,47,（二）、臨床意義 腦脊液免疫球蛋白含量的測定有助于神經(jīng)系統(tǒng)疾病的診斷、療效觀察、預(yù)后判斷。通過測定CSF和血液中的白蛋白計(jì)算以下臨床指標(biāo)：白蛋白商值（QAlb）=（Albcsf/Albs) ×1000 （1）監(jiān)測血腦屏

28、障損傷的程度 （2）提示神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)生疾病的類型IgG生成指數(shù)=（ IgGcsf × Albs ）/ （ IgGs × Albcsf ） 區(qū)分鞘內(nèi)免疫球蛋白的來源：鞘內(nèi)合成， 通過BBB進(jìn)入鞘內(nèi),48,第三節(jié) 血液IgE 和IgD測定方法及臨床意義,一、 血液IgE測定方法及臨床意義

29、包括總IgE（tIgE）和特異IgE（sIgE） 測定方法： 酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA） 熒光酶免疫試驗(yàn)(FEIA) 化學(xué)發(fā)光免疫試驗(yàn)(CLIA)臨床意義 1、 IgE升高： I型變態(tài)反應(yīng)性疾病 嬰兒寄生蟲感染非變態(tài)反應(yīng)性疾?。翰《靖腥尽⒆陨砻庖咝约膊〉?。,49,臨床意義 2、IgE降低：原發(fā)性無丙種

30、球蛋白血癥 腫瘤及化療藥物應(yīng)用后3、影響IgE水平的因素年齡性別種族,50,二、 IgD測定方法及臨床意義 測定方法：放射免疫分析法 乳膠顆粒免疫比濁分析法 酶聯(lián)免疫吸附法 臨床意義 IgD升高：妊娠末期、 IgD型

31、骨髓瘤、 甲狀腺炎、 大量吸煙者 IgD降低：原發(fā)性無丙種球蛋白血癥 肺硅沉著病 細(xì)胞毒藥物治療后,51,第四節(jié) 冷球蛋白測定及臨床意義

32、 冷球蛋白（CG)，又稱冷免疫球蛋白，是血清中的一種病理性蛋白質(zhì)。 在0-4 ℃時(shí)發(fā)生沉淀，在37 ℃又溶解，在低溫時(shí)產(chǎn)生冷沉淀的機(jī)制尚不十分明確，多數(shù)冷球蛋白為免疫復(fù)合物，其抗原可以是外源性的，也可以是內(nèi)源性的測定方法：定性測定 即血細(xì)胞比容管法 定量測定 分光光度法,52,冷球蛋白的類型及臨床意義I型：為單克隆冷球蛋白，由IgG、IgA、IgM或本-周蛋白

33、 組成，約占25%，多見于多發(fā)性骨髓瘤、巨球蛋白血 癥、淋巴瘤、慢性淋巴細(xì)胞白血病等Ⅱ型：單克隆混合冷球蛋白，由單克隆Ig與自身IgG組成， 約占25%，多見于自身免疫性疾病 ，如類風(fēng)濕關(guān)節(jié) 炎、SLE、血管炎、干燥綜合癥等 Ⅲ型：多克隆混合冷球蛋白，由兩類或兩類以上的多克隆

34、 免疫球蛋白組成，約占50% ，多見于傳染性單核細(xì) 胞增多癥、自身免疫性疾病以及感染性疾病等,53,1.什么是免疫球蛋白?其分子基本結(jié)構(gòu)?2.免疫球蛋白分類及亞類?3.免疫球蛋白的生物學(xué)功能及各類免疫球蛋白的 特性。4.血清免疫球蛋白測定方法有哪些?5.比較單向免疫擴(kuò)散法和速率散射比濁法優(yōu)缺點(diǎn)。6.免疫球蛋白IgG、IgA、IgM測定有何臨床意義？,思考題,5