pda培養(yǎng)基的配制方法

1、PDAPDA培養(yǎng)基的配制方法培養(yǎng)基的配制方法一、目的要求一、目的要求1學(xué)習(xí)并掌握配制培養(yǎng)基的一般方法和步驟。2學(xué)習(xí)并掌握棉塞的制作方法。二、培養(yǎng)基的配制原理二、培養(yǎng)基的配制原理培養(yǎng)基是人工配制的各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)供微生物生長(zhǎng)繁殖的基質(zhì)，用以培養(yǎng)、分離、鑒定、保存各種微生物或積累代謝產(chǎn)物。在自然界中，微生物種類繁多，營(yíng)養(yǎng)類型多樣，加上實(shí)訓(xùn)和研究的目的不同，所以培養(yǎng)基的種類很多，但不論是何種培養(yǎng)基，均應(yīng)含有水分、碳源、氮源、能源、無機(jī)鹽等。不同微

2、生物對(duì)pH值要求不一樣，所以配制培養(yǎng)基時(shí)，還應(yīng)根據(jù)不同微生物對(duì)pH值的要求，將培養(yǎng)基調(diào)到合適的pH值范圍。三、實(shí)訓(xùn)材料和用具三、實(shí)訓(xùn)材料和用具瓊脂，可溶性淀粉，葡萄糖，10﹪NaOH，10﹪HCl，1mol／LNaOH，lmol／LHCl，KNO3，NaCl，K2HPO43H20，MgSO47H20，F(xiàn)eSO47H2O；試管，三角瓶，燒杯，量筒，玻璃棒，天平，牛角匙，PH試紙，棉花，牛皮紙，記號(hào)筆，紗布，四、操作方法與步驟四、操作方法與

3、步驟(一)培養(yǎng)基的配制PDA培養(yǎng)基的配制其配方如下：土豆200g，葡萄糖20g，瓊脂15～20g，水1000mL，pH值自然。(1)稱量和熬煮藥品實(shí)際用量計(jì)算后，按培養(yǎng)基配方逐一稱取去皮土豆。土豆切成小塊放入鍋中，加水1000ml，在加熱器上加熱至沸騰，維持20－30min，用可用2層紗布趁熱在量杯上過濾，濾渣棄取。濾液補(bǔ)充水分到1000ml。(2)加熱溶解把濾液放入鍋中，加入葡萄糖20g，瓊脂15～20g（提前搞碎），然后放在石棉網(wǎng)上

4、，小火加熱，并用玻棒不斷攪拌，以防瓊脂糊底或溢出，待瓊脂完全溶解后，再補(bǔ)充水分至所需量。(3)分裝按實(shí)訓(xùn)要求，將配制的培養(yǎng)基分裝入試管或500ml三角瓶?jī)?nèi)。分裝時(shí)可用三角漏斗以免使培養(yǎng)基沾在管口或瓶口上造成污染。分裝量：固體培養(yǎng)基約為試管高度的1／5，滅菌后制成斜面，分裝入三角瓶?jī)?nèi)以不超過其容積的一半為宜；半固體培養(yǎng)基以試管高度的1／3為宜，滅菌后垂直待凝。(4)加棉塞培養(yǎng)基分裝完畢后，在試管口或三角燒瓶口上塞上棉塞(或泡沫塑料塞或試管

5、帽等)，以阻止外界微生物進(jìn)入培養(yǎng)基內(nèi)造成污染，并保證有良好的通氣性能。(5)包扎加塞后，將全部試管用麻繩或橡皮筋捆好，再在棉塞外包一層牛皮紙，以防用潔凈干燥的玻璃棒沾一點(diǎn)培養(yǎng)基滴在試紙上，立即與比色板比較。一般用10%NaOH或HCl調(diào)節(jié)。4、分裝將培養(yǎng)基趁熱倒入墊有紗布的漏斗中，使培養(yǎng)基直接濾至試管或三角瓶中，試管裝量一般為管高的14左右，三角瓶的裝量約為其容量的一半。勿使培養(yǎng)基玷污容器口部?？诓咳忻奕?，試管每7或9支扎一捆，棉塞外

6、面包牛皮紙，以防在滅菌過程中被水汽打濕。5、滅菌分裝后的培養(yǎng)基應(yīng)隨即滅菌。除特殊情況外，一般培養(yǎng)基均用高壓蒸汽滅菌，在104kPa壓力下，滅菌2030min。6、制作斜面或平板將滅菌后的試管趁熱斜置于棍條上，傾斜度以試管中的培養(yǎng)基約占試管長(zhǎng)度的12為宜，凝固后即成斜面培養(yǎng)基。待滅菌后三角瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基冷卻至45~50時(shí)，以無菌操作法向無菌培養(yǎng)皿中倒入培養(yǎng)基，裝置以剛覆蓋整個(gè)培養(yǎng)皿底部為宜（約15ml）凝固后即成平板培養(yǎng)基。五、五、高壓蒸汽

7、滅菌法該法使用高壓滅菌鍋，在121℃，O105MPa壓力下滅菌15～30min。微生物實(shí)訓(xùn)所需的一切器皿、器具、培養(yǎng)基(不耐高溫者除外)、無菌水、工作服等物品都可用此法滅菌。高壓蒸汽滅菌鍋是能耐一定壓力的密閉金屬鍋，有立式或臥式(實(shí)圖81、2)兩種。滅菌鍋上附有壓力表、排氣閥、安全閥、加水口、排水口等。臥式滅菌鍋還附有溫度計(jì)。有的還有蒸汽人口。滅菌鍋的加熱源有電、煤氣和蒸汽三種。高壓蒸汽滅菌的操作過程(1)加水將滅菌鍋內(nèi)層滅菌桶取出，再

8、向外層鍋內(nèi)加入適量的水，以水面與三角架相平為宜。立式鍋是直接加水至鍋內(nèi)底部隔板以下1／3處。有加水口者由加水口加入至止水線處。(2)裝料將裝料桶放回鍋內(nèi)，裝入待滅菌的物品。放置裝有培養(yǎng)基的容器時(shí)要防止液體溢出，瓶塞不要緊貼桶壁，以防冷凝水沾濕棉塞。(3)加蓋擺正鍋蓋，對(duì)齊螺口，然后以同時(shí)旋緊相對(duì)的兩個(gè)螺栓的方式擰緊所有螺栓，打開排氣閥。(4)排氣用電爐或煤氣加熱，待水煮沸后，水蒸氣和空氣一起從排氣孔排出。一般認(rèn)為，當(dāng)排氣流很強(qiáng)并有噓聲時(shí)