土壤微生物研究土壤采集方法

1、土壤微生物研究規(guī)范土壤微生物研究規(guī)范——II.土壤樣品的運輸和貯存土壤樣品的運輸和貯存1.土壤微生物樣品的運輸土樣從采集點到實驗室往往需要經(jīng)歷一定時間的運輸，土樣運輸過程中難免影響土壤的溫度、水分、氧氣等環(huán)境條件，所以要盡快置于黑暗、低溫（4℃）的密閉環(huán)境，盡量維持土壤含水量穩(wěn)定不變，黑暗環(huán)境是為了避免光照下藻類在土壤表明的生長，低溫是為了減少細菌繁殖，維持微生物區(qū)系穩(wěn)定。一般裝于聚乙烯袋子，并松扎。另外，儲存時盡可能避免物理壓實，樣品

2、袋不要堆疊過多，以免破壞土壤原有的團粒結(jié)構(gòu)，并導致底層樣品處于厭氧環(huán)境。微生物取樣的土壤樣品需要在04℃的條件下保存，所以土壤樣品應及時保存在保溫箱或冰箱中（設置04℃），并最好在一周內(nèi)完成前期處理。如果采集地有冰箱、熏蒸所需的真空干燥器和通風櫥等設施，建議將微生物土壤樣品熏蒸浸提后，以冷凍的浸提液保存在塑料小瓶中，以方便運送。如果采集地沒有通風櫥等設施，建議將所取的土壤樣品過篩后冷藏在保溫箱中，以方便運送。具體的流程如下：（1）提前準

3、備好保溫箱及冷凍好的冰板。冰板需要提前12d冷凍，可以再用自封袋裝一定量水分放平冷凍為規(guī)則的冰塊備用。（2）按照微生物取樣規(guī)范進行取樣，及時過篩去除根系、土壤動物等雜質(zhì)，放置在04℃保鮮冰箱中保存。用于DNA或RNA分析的土壤樣品應用干冰速凍。用于RNA分析的土壤樣品在運輸過程中應用干冰保持低溫。用于DNA分析的土壤樣品應用冰盒運輸，也可用干冰。（3）運輸當天將土壤樣品密封好，放入保溫箱中，保溫箱底部、四周及頂部均放置冰板和用自封袋密封

4、的冰塊，保證樣品四周均可接觸冰板或冰塊。注意保證土壤樣品和冰塊分別密封，以防路途中融化的水分進入土壤樣品造成污染。（4）到達目的地后，迅速將樣品放入保鮮冰箱（04℃）保存待測。如果采樣地條件允許，可以根據(jù)規(guī)范上的實驗方法，將樣品熏蒸、浸提后保存在塑料小方瓶中，20℃冷凍，然后再按照上述流程放置保溫箱中運送到目的地，迅速放置在冷凍冰箱中（20℃）保存待測。如果購買不到保溫箱，可以選用運輸水果、蔬菜等的白色泡沫箱，密封嚴實后亦可。由于泡沫箱

5、保溫效果可能不及保溫箱，路途較遠時應多放置冰板及5）特別要注意微生物樣品在實驗室保存和分析過程中的密封，以免凝結(jié)的水汽或其他污染源對樣品造成污染。6）每份樣品保存量不能過多，不同樣品之間避免堆疊，以免下部樣品由于擠壓形成厭氧環(huán)境。2.2微生物樣品的儲存時間1）待測樣品的短期保存對于不同微生物種類的最適宜保存溫度并不相同，低溫也可以造成某些微生物的死亡，到目前為止尚不能確定低溫確實可以保持原有微生物區(qū)系不變，因此土壤微生物樣品要求在最短的

6、時間內(nèi)分析。一般認為土壤鮮樣4℃下可保存一周，土壤浸提液20℃下可保存一個月。ISO10381認為一般土壤微生物樣品在進行分析前最長可以保存3個月，如果用于DNA分析應保存在20℃條件下，用于RNA分析則保存在80℃條件下。2）土壤微生物樣品的長期保存（大于3個月）根據(jù)保存年限和針對的指標的不同，樣品應保存在20℃、80℃或180℃條件下（表IV1）。已證實溫帶土壤樣品在20℃保存12月不會抑制微生物活性（如氨氧化活性）。而且用于磷酸脂

7、肪酸（PLFA）和DNA分析的樣品可以在20℃保存1到2年。用于RNA分析土壤樣品也可在80℃保存1到2年。用于DNA、RNA和PLFA分析用的土壤樣品推薦使用液氮速凍法。表IV1IV1好氣條件下土壤樣品的儲存條件和年限好氣條件下土壤樣品的儲存條件和年限鮮樣（4℃）鮮樣（20℃）a鮮樣（80℃）或液氮（180℃）a指標引用標準月年年P(guān)LFA，PLEL——b210DNA——210RNA————10生物量基質(zhì)誘導呼吸法氯仿熏蒸浸提法ISO1