免疫球蛋白a檢測三

1、實驗診斷學課件教學,牡丹江醫(yī)學院檢驗系實驗診斷學教研室,第八章 臨床常用免疫學檢查,,第一節(jié) 血清免疫球蛋白檢測,第二節(jié) 血清補體檢測,第三節(jié)細胞免疫檢測,第四節(jié) 腫瘤標志物檢檢測,第五節(jié) 自身抗體檢測,第六節(jié) 感染免疫檢測,第一節(jié) 血清免疫球蛋白檢測,免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)是指一組具有抗體活性的球蛋白，由漿細胞合成與分泌；存在于機體的血液、體液、外分泌液和部分細胞的膜上。Ig因其功能和理化性質(zhì)分IgG、I

2、gA、IgM、IgD和IgE五大類,,第一節(jié) 血清免疫球蛋白檢測,本節(jié)重點及習題,一、免疫球蛋白G檢測,二、免疫球蛋白A檢測,三．免疫球蛋白M檢測,四、免疫球蛋白E檢測,五、血清M蛋白檢測,一、免疫球蛋白檢測免疫球蛋白G(IgG)為人體含量最多和最主要的Ig占總免疫球蛋白的70％-80％對病毒、細菌和寄生蟲等都有抗體活性是唯一能夠通過胎盤的Ig，通過自然被動免疫使新生兒獲得免疫抗體。,,[臨床意義] 1生理性變化：孕期22

3、～28周間胎兒血IgG濃度與母體血濃度相等，出生后母體IgG逐漸減少，隨后逐漸增加，到16歲前達成人水平2 病理性變化⑴ IgG 增高 是再次免疫應(yīng)答的標志。常見于各種慢性感染、慢性肝病、淋巴瘤、感染以及自身免疫性疾病如系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)、類風濕關(guān)節(jié)炎等,[參考值]7.0～16.6g/L,單純性IgG增高:主要見于免疫增殖性疾病,如分泌型多發(fā)性骨髓瘤(MM),可見到IgG、lgA、lgD或IgE增高⑵ IgG降低2.IgG降

4、低見于各種先天性和獲得性體液免疫缺陷病、聯(lián)合免疫缺陷病也見于重鏈病、輕鏈病、腎病綜合征、病毒感染和免疫抑制劑患者。兒童較成年人低，女性稍高于男性,二、免疫球蛋白A檢測免疫球蛋白A(IgA)分為血清型以與分泌型IgA(SIgA)兩種。前者占血清總Ig的10％－15％,后者在外分泌系統(tǒng)中有更重要的免疫功能呼吸道、消化道、泌尿生殖道的淋巴樣組織合成大量的SIgASIgA與這些部位的局部感染、炎癥或腫瘤等病變密切相關(guān)。,,,[參考值

5、] 成人血清IgA為0.7～3.5g/L SIgA 唾液平均為0.3g/L 淚液為30 ～ 80g/L 初乳平均為5.06g/L 糞便平均為1.3g/L,[臨床意義]1 生理性變化 隨年齡增加而增加，到16歲前達成人水平⒉病理性變化⑴IgA增高:見于IgA型MM、SLE、類風濕性關(guān)節(jié)炎、肝硬化、濕疹和腎臟疾病等2.IgA降低:見于反復(fù)呼吸道感染、非 IgA型MM、重鏈

6、病、輕鏈病、原發(fā)性和繼發(fā)性免疫缺陷病和自身免疫性疾病等。,三．免疫球蛋白M檢測免疫球蛋白M(IgM)是分子質(zhì)量最大的Ig,約占血清總Ig的5％～10％IgM是有效的凝聚和溶解細胞的因子天然同族凝聚素(抗A、抗B)、冷凝集素及傷寒沙門菌的抗體均屬此類[參考值] 成人血清IgM 0.5 ～ 2.6g/L,,[臨床意義]⒈生理性變化 從孕20周起，胎兒自身合成大量IgM，胎兒和新生兒IgM濃度是成人水平的10％，8-16歲前達成人水

7、平⒉病理性變化⑴IgM增高:見于初期病毒性肝炎、肝硬化、類風濕關(guān)節(jié)炎、SLE等 單純IgM增高提示為病原體引起的原發(fā)性感染 ，若臍血中IgM＞0.2g/L時，提示宮內(nèi)感染此外,在原發(fā)性巨球蛋白血癥時,IgM呈單克隆性明顯增高2.IgM降低:見于IgG型重鏈病、IgA型MM、先天性免疫缺陷癥、免疫抑制療法后、淋巴系統(tǒng)腫瘤和腎病綜合征等,四、免疫球蛋白E檢測免疫球蛋白E為血清中最少的一種Ig,約占血清總Ig的0.002％它是一種

8、親細胞性抗體與變態(tài)反應(yīng)、寄生蟲感染及皮膚過敏等有關(guān)[參考值]ELISA法為0.1～0.9mg/L,[臨床意義]⒈生理性變化 嬰兒臍血IgE水平很低，12歲時達成人水平⒉病理性變化⑴IgE增高:見于IgE型MM、重鏈病、肝臟病、結(jié)節(jié)病、類風濕關(guān)節(jié)炎，以及各種過敏性疾病如異位性皮炎、過敏性哮喘、過敏性鼻炎、間質(zhì)性肺炎、蕁麻疹、嗜酸性粒細胞增多癥、皰疹樣皮炎、寄生蟲感染等,,⑵IgE降低見于先天性或獲得性丙種球蛋白缺乏癥惡性腫

9、瘤長期用免疫抑制劑共濟失調(diào)性毛細血管擴張癥等,五、血清M蛋白檢測M蛋白(M protein)或稱單克隆免疫球蛋白它是一種單克隆B細胞增殖產(chǎn)生的、具有相同結(jié)構(gòu)和電泳遷移率的、免疫球蛋白分子及其分子片段 [參考值]蛋白電泳法、免疫比濁法或免疫電泳法:正常人為陰性,[臨床意義]檢測到M蛋白，提示單克隆免疫球蛋白增殖病,見于①多發(fā)性骨髓瘤：以IgG型最常見，其次為 IgA型，IgD和 IgE罕見，也有IgM型的報道②巨球蛋白血癥

10、(Waldenstrom癥):存在大量單克隆IgM,③重鏈?。撼霈F(xiàn)Ig重鏈(γ、α和μ重鏈)④輕鏈?。撼霈F(xiàn)單克隆游離輕鏈⑤半分子病：系由一條重鏈和一條輕鏈組成的單克隆Ig片段⑥7SIgG?。簽閻盒訫蛋白病等。,第二節(jié) 血清補體檢測,補體(complement,C)是一組具有酶原活性的糖蛋白它由傳統(tǒng)途徑的九種成分C1(Clq、C1r、C1s)～C9；旁路途徑的三種成分及其衍生物,B、D、P、H、I等因子組成,補體、體液因子或免疫

11、細胞共同參與滅活病原體的免疫反應(yīng)也參與破壞自身組織或自身細胞而造成的免疫損傷補體的檢測可了解補體功能以及體內(nèi)免疫反應(yīng)、免疫損傷等狀態(tài)。,,第二節(jié) 血清補體檢測,,本節(jié)重點及習題,一、總補體溶血活性檢測,二、補體C1q檢測,三、補體C3檢測,四、補體C4檢測,五、補體旁路B因子檢測,一、總補體溶血活性檢測總補體溶血活性(total hemilytic complement activity,CH50)以溶血素(抗體)致敏的綿羊

12、紅細胞(抗原抗體復(fù)合物)激活待測血清中的C1引起補體活化的連鎖反應(yīng),在綿羊紅細胞上形成多分子的聚合物,影響其膜表面的結(jié)構(gòu)與功能,,最終導致綿羊紅細胞溶解。溶血程度與補體量呈正相關(guān)一般以50％溶血作為檢測終點(CH50),較為靈敏、準確[參考值]試管法為 50～100kU/L,[臨床意義]主要反映補體傳統(tǒng)途(C1～C9)活化的活性程度。 ①CH50增高見于急性炎癥組織損傷某些惡性腫瘤.,②CH50減低:更有意義見于各種

13、免疫復(fù)合物性疾病如腎小球腎炎自身免疫性疾病(如SLE)感染性心內(nèi)膜炎、病毒性肝炎和慢性肝病重癥營養(yǎng)不良和遺傳性補體成分缺乏癥等,二、補體C1q檢測補體﹙comlement）C1q是構(gòu)成補體C1的重要組分C1是:一個C1q分子、2個C1r分子和2個C1s分子構(gòu)成的鈣離子依賴性復(fù)合物目前常規(guī)檢測Clq[參考值]ELISA法為0.18－0.19g/L,[臨床意義] ①Clq增加:見于骨髓炎、類風濕關(guān)節(jié)炎、痛風、過敏性紫癜等

14、 ②Clq降低見于SLE和混合型結(jié)締組織疾病重度營養(yǎng)不良、腎病綜合征、重癥聯(lián)合免疫缺陷等,三、補體C3檢測補體C3是一種由肝臟合成的β2-球蛋白由α和β兩條多肽鏈組成C3在補體系統(tǒng)各成分中含量最多是傳統(tǒng)途徑和旁路途徑被激活的關(guān)鍵物質(zhì)[參考值]成人0.8～1.5 g/L,[臨床意義]1 生理性變化 隨年齡的增長而增長⒉病理性增高①增高:見于急性炎癥、傳染病早期、腫瘤、排異反應(yīng)等②減低:見于大多數(shù)急性腎小球腎炎、鏈

15、球菌感染后腎炎、狼瘡性腎炎患者。還見于活動性SLE和類風濕關(guān)節(jié)炎活動期、慢性活動性肝炎、肝硬化、肝壞死等因此檢測C3對這些疾病診斷有價值,四、補體C4檢測補體C4是一種多功能β1-球蛋白在補體傳統(tǒng)途徑活化中，C4被C1s水解為C4a、C4bC4a、C4b在補體活化、促進吞噬、防止免疫復(fù)合物沉著和中和毒素等方面發(fā)揮作用[參考值]0.20～0.6g/L,[臨床意義]①升高:見于各種傳染病、急性風濕熱、結(jié)節(jié)性動脈周圍炎、皮肌炎、關(guān)

16、節(jié)炎和組織損傷等②降低:見于自身免疫性肝炎、狼瘡性腎炎、SLE、I型糖尿病、胰腺癌、多發(fā)性硬化癥、類風濕關(guān)節(jié)炎、IgA性腎病、遺傳性IgA缺乏癥,五．補體旁路B因子檢測補體旁路﹙factor﹚B因子是一種不耐熱的β球蛋白,50℃30分鐘即可失活。它可被D因子裂解為Ba、Bb兩個片段Bb與C3b結(jié)合構(gòu)成旁路途徑的C3轉(zhuǎn)化酶B因子是補體旁路活化途徑中的一個重要成分,又稱C3激活劑前體,[參考值]0.10～0.4 g／L[臨床意義]

17、同補體旁路途徑溶血活性檢測增高見于某些自身免疫性疾病、腎病綜合征。慢性腎炎、惡性腫瘤減低見于肝病、急性腎小球腎炎、自身免疫性溶血性貧血,第三節(jié) 細胞免疫檢測,一 T細胞亞群的檢測 ﹙一﹚T細胞花結(jié)實驗 ﹙二﹚T細胞轉(zhuǎn)化實驗 ﹙三﹚T細胞分化抗原測定 二 B細胞分化抗原檢測 三 自然殺傷細胞免疫檢測 四 細胞因子檢測,,,,,﹙一﹚T細胞花結(jié)形成試驗

18、 T細胞表面有特意性綿羊紅細胞﹙E﹚受體和T細胞識別受體﹙TCR﹚其中E受體曾廣泛被用做鑒定和計數(shù)T細胞的標志。T細胞表面的E受體，可與綿羊紅細胞結(jié)合成花結(jié)樣細胞，稱E玫瑰花形成實驗﹙ERFT﹚此實驗花結(jié)形成實驗因其操作簡便易行曾被廣泛使用，但影響因素較多，因此逐漸被檢測CD抗原方法所取代,﹙二﹚T細胞分化抗原測定 T細胞表面有多種特意性抗原。WHO﹙1986年﹚統(tǒng)稱其為白細胞分化抗原﹙cluster differenti

19、ation，CD﹚ CD3＋代表總T細胞， CD3＋/ CD4＋代表T輔助細胞﹙Th﹚， CD3＋/ CD8＋代表T抑制細胞﹙Ts﹚等。應(yīng)用這些細胞的單克隆抗體與T細胞表面抗原結(jié)合后，再與熒光標記二抗﹙兔或羊抗鼠IgG﹚反應(yīng)，在熒光顯微鏡下或流式細胞儀中計數(shù)CD陽性細胞的百分率,[參考值]免疫熒光法﹙IFA﹚ CD3＋為63.1％±10.8 ％ CD3＋/ CD4＋（Th﹚為42.8％

20、7;9.5％ CD3＋/ CD8＋ （Ts﹚為19.6％±5.9％ CD4 CD8﹙ Th / Ts ﹚為2.2％±0.7％：流式細胞術(shù) CD3＋為61％～85 ％； CD3＋/ CD4＋（Th﹚ 28％～58 ％ ； CD3＋/ CD8＋ （Ts﹚為19％～48％； CD4 CD8﹙ Th

21、 / Ts ﹚為0.9％～2.0％；,[臨床意義]①CD3＋降低：見于自身免疫性疾病。SLE 類風濕關(guān)節(jié)炎② CD3＋/ CD4＋（Th﹚降低：惡性腫瘤、遺傳性免疫缺陷病、愛滋?、?CD3＋/ CD8＋ （Ts﹚降低 見于自身免疫性疾病或變態(tài)反應(yīng)性疾病。④ CD4/ CD8 CD8 ﹙ Th / Ts ﹚比值降低：見于愛滋?、荼O(jiān)測器官移植排斥反應(yīng)CD4/ CD8﹙ Th / Ts ﹚比值增高⑥ CD3＋ CD4＋ CD8＋較

22、高且有CD1＋ CD2＋ CD5＋ CD7＋增高則可能為T細胞型急性淋巴細胞性白血病,二 、B細胞分化抗原檢測 B細胞是在鳥類法氏囊﹙bursa of Fabricius﹚或其同功器官﹙骨髓 bone marrow﹚內(nèi)發(fā)育成熟的細胞，因此稱為法氏囊或骨髓依賴的淋巴細胞，簡稱B細胞。 B細胞受抗原刺激后可分化為產(chǎn)生抗體的漿細胞， B細胞是體內(nèi)唯一能產(chǎn)生抗體﹙免疫球蛋白分子﹚的細胞,[參考值]流式細胞術(shù)：CD19+﹙11.74

23、±3.37﹚％[臨床意義] ①升高：見于急性淋巴細胞白血病﹙B細胞型，且有SmIg、HLA-D表達﹚、慢性淋巴細胞白血病等 ②降低：見于無丙種球蛋白血癥、使用化療或免疫抑制劑后。,第四節(jié) 腫瘤標志物檢測,腫瘤標志物(tumor marker)是由腫瘤細胞本身合成、釋放或者是由機體對腫瘤細胞反應(yīng)而產(chǎn)生的一類物質(zhì)。這類物質(zhì)可反映細胞惡變各個階段的表型及基因特征性。主要包括蛋白質(zhì)類。糖類物質(zhì)和酶類腫瘤標志物

24、。,附圖,,第三節(jié) 腫瘤標志物檢測,一、蛋白質(zhì)腫瘤標志物的檢測,(一)甲種胎兒球蛋白測定,(二)癌胚抗原測定,(三)組織多肽抗原測定,(四)前列腺特異抗原測定,第四節(jié) 腫瘤標志物檢測,一、蛋白質(zhì)腫瘤標志物的檢測二、糖脂腫瘤標志物檢測,本節(jié)重點及習題,(五)鱗狀上皮細胞癌抗原測定,(三)糖鏈抗原19－9測定,(四)癌抗原125測定,一、蛋白質(zhì)腫瘤標志物的檢測 (一)甲種胎兒球蛋白測定甲種胎兒球蛋白(alpha fetoprot

25、ein,AFP)是在胎兒早期由肝臟合成的一種糖蛋白出生后合成受到抑制,當干細胞或生殖腺胚胎組織發(fā)生惡性病變時，有關(guān)基因重新被激活使原來已喪失合成AFP能力的細胞重新開始合成,以致血中AFP含量明顯升高因此血中AFP濃度檢測對診斷干細胞癌及滋養(yǎng)細胞惡性腫瘤有重要的臨床價值,[參考價值] RIA或ELISA法為低于25μg/L[臨床意義]1.原發(fā)性肝細胞性肝癌患者血清AFP增高，診斷閾值為超過300μg/L，增高率約為75

26、％-80％；約有10％的原發(fā)性肝癌患者其AFP為陰性。,2.生殖腺胚胎癌(睪丸癌、卵巢癌、畸胎瘤等)、胃癌或胰腺癌時，血中AFP含量也可升高。3.病毒性肝炎、肝硬化時AFP也有不同程度的升高(20-200μg/L)4.妊娠3-4個月、孕婦AFP開始升高；7-8個月達高峰，以后下降；但多低于300μg/L。,(二)癌胚抗原測定癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)是一種富含多糖的蛋白復(fù)合物胎兒早期的消

27、化管及某些組織均有合成CEA的能力，但孕六個月以后含量逐漸減少，出生后含量極低檢測它對腫瘤的診斷、預(yù)后、復(fù)發(fā)判斷有意義,[參考值]ELISA法和RIA法為＜15μg/L[臨床意義] 1.CEA明顯增高見于、胰腺癌、結(jié)腸癌、乳腺癌、胃癌、肺癌等患者。,2.動態(tài)觀察一般病情好轉(zhuǎn)時，CEA濃度下降，病情加重時可升高3.結(jié)腸炎、胰腺炎、肝臟疾病、肺氣腫及支氣管哮喘等也常見CEA輕度升高4.96％～97 ％非吸煙健康人血清CEA濃度＜

28、2.5μg/L，大量吸煙者中有20％～40％的人CEA＞ 2.5μg/L，少數(shù)人大于5.0μg/L。,(三)組織多肽抗原測定組織多肽抗原(tissue polypeptide antigen,TPA)是存在于胎盤和大部分腫瘤組織細胞膜和細胞質(zhì)中的一種單鏈多肽。在惡性腫瘤患者血清中的檢出率高達70％以上但它的增高與腫瘤發(fā)生部位和組織類型無相關(guān)性在觀察療效上則有較高的敏感性[參考值]ELISA法為＜130U/L,[臨床意義]1.惡

29、性腫瘤患者血清TPA水平可顯著升高。2.經(jīng)治療好轉(zhuǎn)后，TPA水平降低；若TPA再次升高，提示有腫瘤復(fù)發(fā)。3.TPA和CEA同時檢測可有利于惡性與非惡性乳腺病的鑒別診斷。4.急性肝炎、胰腺炎、肺炎、妊娠后3個月都可升高。,(四)前列腺特異抗原測定 前列腺特異抗原(prostate specific antigen,PSA)是一種由前列腺分泌的單鏈糖蛋白,它存在于前列腺管道的上皮細胞中。在前列腺癌時可見PSA血清水平明顯升高,今年發(fā)

30、現(xiàn)血清總PSA(T-PSA)80％以結(jié)合形式存在,稱復(fù)合PSA(c-PSA)20％的以游離PSA形式存在(F-PSA)其比值對診斷更有特異和準確性,[參考值]RIA法和（酶聯(lián)免疫印跡技術(shù)）CLIA法： T-PSA＜4.0μg/L，F(xiàn)-PSA<0.8μg/L F/T比值＞0.25[臨床意義]1.前列腺癌時60％－90％患者血清PSA水平明顯升高；當行外科切除術(shù)后，90％患者血清PSA水平明顯

31、降低,2.若見PSA水平升高，即有轉(zhuǎn)移或復(fù)發(fā)的可能3.良性前列腺瘤、前列腺肥大或急性前列腺炎時，約有14％的患者血清PSA水平升高，此時應(yīng)注意鑒別,(五)鱗狀上皮細胞癌抗原測定 鱗狀上皮細胞抗原(squamus cell carcinoma antigen,SCC)是腫瘤相關(guān)抗原TA-4的亞型，是一種糖蛋白 [參考值] RIA和CLIA法為≤1.5μg/L。,[臨床意義]1.血清中SCC水平升高，可見于83％的宮頸癌、

32、25％-75％的肺鱗狀細胞癌、30％Ⅰ期食管癌、89％的Ⅲ期食管癌；2.也見于卵巢癌、子宮癌和頸部鱗狀上皮細胞癌。3.臨床上用于檢測上述惡性腫瘤的治療效果、復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移或評價預(yù)后。,,二、糖脂腫瘤標志物檢測(三)糖鏈抗原19－9測定 糖鏈抗原19－9(carbohydrate antigen19-9,CA19-9)是一種糖蛋白。胚胎期分布于胎兒的胰腺。肝膽和腸等組織；在成人的胰、膽等部位也有少量存在。[參考值] 固相放射免

33、疫分析(IRMA)法和ELISA法： 健康人血清CA19-9 3.7萬U/L,[臨床意義]1.胰腺癌、肝膽和胃腸道疾病時血中CA19-9的水平可明顯升高。其陽性率胰腺癌為85％－95％膽囊癌和膽管癌為85％左右胃癌、結(jié)腸癌為40％直腸癌為30％－50％但無早期診斷價值,對早期病人的敏感度僅為30％,2.連續(xù)檢測對病情進展、手術(shù)療效、預(yù)后估計及復(fù)發(fā)診斷有重要價值。3.急性胰腺炎、膽汁淤積型膽管炎、膽石癥、

34、急性肝炎、肝硬化等，血清CA19-9也可出現(xiàn)不同程度的升高。4.結(jié)合CEA檢測,對胃癌診斷符合率可達85％,(四)癌抗原125測定 癌抗原125(cancer antigen125,CA125)為一種糖蛋白性腫瘤相關(guān)抗原,存在于卵巢腫瘤的上皮細胞內(nèi)。當患有上皮性卵巢癌和子宮內(nèi)膜癌時,病人血清CA125水平可明顯升高。 [參考值]＜3.5萬U/L,[臨床意義]1.卵巢癌病人血清CA125水平明顯升高,其陽性率高達60％-90％

35、,故對診斷卵巢癌有較大臨床價值,尤其對觀察治療效果和判斷復(fù)發(fā)較為靈敏。,2.宮頸癌、乳腺癌、胰腺癌、膽道癌、肝癌、胃癌、結(jié)腸癌、肺癌等也有一定的陽性反應(yīng)。3.3％～6％的良性卵巢瘤、子宮肌瘤病人血清CA125有時也會明顯升高,但多數(shù)不超過10萬U/L。4.肝硬化失代償期血清CA125明顯升高。,第四節(jié) 自身抗體檢測,某些原因削弱或破壞健康人的自身免疫耐受(autoimmune tolerance)，免疫系統(tǒng)就會對自身組織或成分產(chǎn)生免

36、疫應(yīng)答，稱為自身免疫(autoimmunity)。由于自身免疫而產(chǎn)生的疾病稱為自身免疫病(autoimmune disease,AID)。按自身抗原分布的范圍可分器官特異性和非器官特異性。診斷自身免疫病的重要方法是作自身抗體免疫檢測。,第四節(jié) 自身抗體檢測,二、抗核抗體檢測,本節(jié)重點及習題,一、類風濕因子,(一)抗核抗體檢測,(二)抗DNA抗體測定,一、類風濕因子類風濕因子(rheumatoid factor,RF)是變性lgG刺激機

37、體產(chǎn)生的一種自身抗體，主要存在于類風濕性關(guān)節(jié)炎患者的血清和關(guān)節(jié)液內(nèi)。它有IgM型，也有IgG、IgA、lgD和IgE型。用乳膠凝集法測出的主要是IgM型；速率法敏感但不能分類型。[參考值]乳膠凝集法、血清稀釋度低于1:10 速率比值法＜30U/L。,[臨床意義]類風濕性疾病時，RF的陽性率可高達70％－90％，類風濕關(guān)節(jié)炎的陽性率為70％。IgG型:與患者的滑膜炎、血管炎和關(guān)節(jié)外癥狀有關(guān)IgM型與IgA型的效價與病情、骨質(zhì)破

38、壞有關(guān),其他自身免疫性疾病，如多發(fā)性肌炎、硬皮病、干燥綜合征、SLE、自身免疫性溶血、慢性活動性肝炎等也見RF陽性。某些感染性疾病，如傳染性單核細胞增多癥、結(jié)節(jié)病、感染性心內(nèi)膜炎等也多呈現(xiàn)陽性反應(yīng)。故本試驗的特異性不高，應(yīng)予鑒別。,二、抗核抗體檢測◇(一)抗核抗體檢測◇抗核抗體檢測(antinuclear antibody,ANA)是指抗細胞核成分［脫氧核糖核蛋白(DNP)、DNA、可提取的核抗原(ENA)和RNA等］的自身抗體的

39、總稱◇ANA的性質(zhì)主要是IgG,也有IgM、IgA。這種抗體無器官和種族的特異性,◎免疫熒光法以鼠肝細胞核作抗原時,該抗體可與之結(jié)合,再加入熒光標記抗人Ig后,胞核區(qū)發(fā)出黃綠色熒光而胞漿區(qū)不發(fā)熒光。根據(jù)細胞核染熒光的圖像可分析為均質(zhì)型、邊緣型、顆粒型和核仁型等四型?！騕參考值](間接熒光抗體試驗)IFA法為陰性,血清滴度＞1:40為陽性。,,[臨床意義]1.ANA陽性⑴最多見于未治療的SLE,陽性率達80％～100％;活動期SL

40、E幾乎100％陽性。經(jīng)皮質(zhì)激素治療后,陽性率可降低⑵藥物性狼瘡(100％)⑶混合性結(jié)締組織病(10％)⑷全身性硬皮病(85％-95％),⑸多發(fā)性肌炎(3％-90％)⑹狼瘡性腎炎(95％-100％)⑺原發(fā)性膽汁性肝硬化(95％-100％)⑻其他還見于干燥綜合征、類風濕關(guān)節(jié)炎,橋本甲狀腺炎等。2.熒光核型:細胞核熒光有四種核型，其形狀和意義見表。,,(三)抗DNA抗體測定 抗DNA抗體（anti-DNA antibo

41、dy,抗-DNA)分為抗單鏈DNA(single stranded-DNA,ss－DNA)抗體和抗雙鏈抗ds-DNA抗體和抗Z－DNA抗體。抗ds-DNA抗體的靶抗原是細胞核中DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)，它的檢測有臨床重要性。目前最敏感和特異的方法是用馬疫錐蟲或綠蠅短膜蟲作為抗原基質(zhì)進行間接免疫熒光測定[結(jié)果判定] 。短膜蟲動基體均勻質(zhì)性著色，核漿成弱均質(zhì)性為陽性。,,[臨床意義] 1.抗ds-DNA抗體陽性：見于活動期的SLE,陽性率7

42、0%-90%。本試驗特異性較高,但敏感性較低。目前認為,能結(jié)合補體的抗ds-DNA抗體,在SLE特別是并發(fā)狼瘡性腎炎患者的發(fā)病機制中起重要作用。其他風濕病中抗ds-DNA抗體也可陽性,2.抗ss－DNA抗體陽性:見于SLE(陽性率70％－95％)，尤其是合并有狼瘡性腎炎。還可見于一些重疊結(jié)締組織病、藥物誘導的狼瘡和慢性活動性肝炎等，但不具特異性。,,抗線粒體抗體測定；抗線粒體抗體是一種針對細胞質(zhì)中線粒體內(nèi)膜和外膜蛋白成分的自身抗體，無器

43、官和屬特異性，該抗體主要是IgG。許多肝臟疾病時可檢出AMA。其陽性率在原發(fā)性膽汁性肝硬化為90.5肝外膽管阻塞為陰性。AMA可作為原發(fā)性膽汁性肝硬化和肝外膽道阻塞性肝硬化癥的鑒別診斷。,,抗甲狀腺抗體測定甲狀腺功能亢進慢性甲狀腺炎甲狀腺功能低下具有自身免疫病的特征，常可測出甲狀腺抗體。抗甲狀腺球蛋白抗體和抗甲狀腺微粒體抗體?？辜谞钕偾虻鞍卓贵w和抗甲狀腺微粒體抗體在臨床實驗中應(yīng)用最廣，診斷價值也較大1.抗甲狀腺球蛋白抗體甲狀腺球蛋白

44、是由甲狀腺濾泡細胞合成的一種糖蛋白，主要是IgG。 90%-95%橋本甲狀腺炎，52%-58%甲亢和35%甲狀腺癌患者可出現(xiàn)抗TG陽性。重癥肌無力、肝臟病、風濕性血管病、糖尿病也可出現(xiàn)陽性,,抗甲狀腺微粒體抗體是針對甲狀腺微粒體的一種抗體。 抗TM陽性檢出率；橋本甲狀腺炎為50%-100%，甲減為88.9%；甲狀腺腫瘤為13.1%，單純甲狀腺腫為8.6%；亞急性甲狀腺炎為17.2%-25%；SLE為15.4%-44.7%；其他風濕病

45、為30%，抗TG與抗TM同時檢測，可以提高陽性檢出率。,,抗心肌抗體測定；抗心肌抗體的自身抗原包括線粒體內(nèi)膜上的腺苷酸轉(zhuǎn)移蛋白、心肌肌質(zhì)蛋白、原肌球蛋白和熱休克蛋白。心肌炎、心肌衰竭、風濕熱、重癥肌無力、心疾病和心臟手術(shù)后患者均可檢測到抗心肌抗體。,,抗心磷脂抗體測定；抗心磷脂抗體測定是一組針對各種帶負電荷磷脂的自身抗體?？沽字贵w與內(nèi)皮細胞或血小板膜上的磷脂結(jié)合，破壞細胞的功能。造成血液的高凝狀態(tài)；與紅細胞結(jié)合，在補體的參與下，造成

46、溶血性貧血 。ACA是抗磷脂抗體中的一種，特異性較強，能干擾磷脂依賴的凝血過程，與各種疾病關(guān)系的研究較多，與自身免疫性疾病和磷脂綜合征的關(guān)系較為密切。,,ACA在S,第六節(jié) 感染免疫檢測,一、細菌感染免疫檢測 人感染病原體后經(jīng)過一段時間產(chǎn)生的特異性抗體一般可持續(xù)數(shù)月或更長時間，因而檢測抗體不僅可用于現(xiàn)癥診斷，還是疾病追溯性調(diào)查的一種方法。 (一)血清抗鏈球菌溶血素“O”試驗 溶血素“O”是A群溶血性鏈球菌產(chǎn)生的具有溶血活性的代

47、謝產(chǎn)物，相應(yīng)抗體稱抗鏈球菌溶血素“O”(抗O或ASO)。,[臨床意義]陽性表示病人近期內(nèi)有A群溶血性鏈球菌感染，常見于活動性風濕熱、風濕性關(guān)節(jié)炎、風濕性心肌炎、急性腎小球腎炎、急性上呼吸道感染、皮膚和軟組織的感染等臨床意義]陽性表示病人近期內(nèi)有A群[溶血性鏈球菌感染，常見于活動性風濕熱、風濕性關(guān)節(jié)炎、風濕性心肌炎、急性腎小球腎炎、急性上呼吸道感染、皮膚和軟組織的感染等。,2.傷寒和副傷寒沙門菌抗體IgM測定[參考值]ELISA法陰性或

48、滴度＜1:20[臨床意義]IgM抗體于發(fā)病后一周即出現(xiàn)升高，有早期診斷價值。3.傷寒和副傷寒沙門菌可溶性抗原測定[參考值]乳膠凝集法為陰性。[臨床意義]對確診傷寒沙門菌感染有重要意義。,(五)結(jié)核分枝桿菌抗體和DNA測定[參考值]膠體金或ELISA法檢測抗體陰性；PCR法檢測DNA陰性。[臨床意義]抗體陽性表示有結(jié)核分枝桿菌感染；DNA檢測特異性更強，靈敏度更高。,二、病毒感染免疫檢測(一)流行性乙型腦炎病毒抗體IgM測定

49、流行性乙型腦炎病毒是我國夏秋季流行的主要傳染病之一。[參考值]ELISA和微量間接免疫熒光法陰性[臨床意義]當恢復(fù)期血清抗體滴度比急性期≥4倍時，有輔助診斷意義，可用于臨床回顧性診斷,（一）TORCH試驗為婦產(chǎn)科產(chǎn)前的常規(guī)檢查項目TORCH包括：弓形蟲，風疹病毒，巨細胞病毒，單純皰疹病毒Ⅰ型和Ⅱ型的病原抗體檢測⒈風疹病毒檢測 若在早孕時發(fā)生胎兒先天性風疹感染，新生兒致殘致畸率可達80％，主要損害五官神經(jīng)系統(tǒng)和智力，有流行性【參

50、考值】IgM、 IgG抗體均為陰性。 【臨床意義】,如果被檢者2種抗體均無，應(yīng)視為易感者，可注射疫苗保護。 有IgM抗體出現(xiàn)均應(yīng)做婦產(chǎn)科咨詢后決定是否治療性流產(chǎn)或繼續(xù)妊娠。 僅有IgG抗體應(yīng)注意其滴度變化，如果滴度低且無變化為既往感染， 若測定患者急性期和恢復(fù)期雙份血清，抗體滴度明顯升高4倍以上，則具有診斷近期風疹感染的意義。,⒉單純皰疹病毒（Ⅰ型和Ⅱ型）檢測 單純皰疹病毒（Ⅰ型和Ⅱ型）均有

51、一定的致畸性、先天感染后影響新生兒神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育，孕早期感染影響胎兒發(fā)育，故也作為早孕臨床篩檢項目，抗原檢測應(yīng)用不廣泛。抗體檢測可分別進行Ⅰ型和Ⅱ型的IgM和IgG抗體的檢測， IgM型為近期感染， IgG型多為既往感染。,⒊巨細胞病毒﹙CMV﹚檢測巨細胞病毒屬皰疹類病毒，其先天感染的致畸性僅次于風疹病毒，主要也是造成神經(jīng)系統(tǒng)及智力的障礙。實驗室可用EIA法測CMV- IgM以了解近期感染， 抗CMV- IgG可以用流行病學調(diào)查。 ⒋

52、弓形蟲檢測 先天性弓型蟲感染可引起神經(jīng)系統(tǒng)，特別是生后原期智力障礙?？贵w檢測可測特意性IgM和IgG型抗體。 IgM 型抗體提示現(xiàn)癥感染，IgG型抗體一般提示既往感染。,二、病毒感染免疫檢測(二)流行性乙型腦炎病毒抗體IgM測定流行性乙型腦炎病毒是我國夏秋季流行的主要傳染病之一。[參考值]ELISA和微量間接免疫熒光法陰性[臨床意義]當恢復(fù)期血清抗體滴度比急性期≥4倍時，有輔助診斷意義，可用于臨床回顧性診斷,(三)嗜異性凝集試驗

53、及吸收試驗傳染性單核細胞增多癥由 EB病毒感染所致。[參考值]陰性或凝集效價<1:7(紅細胞凝集法)[臨床意義]EB病毒感染后2周抗體效價達高峰，常＞1：56；以后下降；3個月后消失；若第一次檢測效價增高不明顯；而追蹤檢查時效價上升4倍以上；更有診斷價值。,(七)嚴重急性呼吸綜合征病毒抗體及RNA測定嚴重急性呼吸綜合征(SARS)是由 SARS冠狀病毒(SARS－CoV)引起的21世紀的新傳染病。SARS－CoV是具有包膜

54、的單鏈正義RNA病毒是導致SARS(俗稱非典型肺炎”)的病原體。[參考值]ELISA和IFAte檢測抗體陰性；RT－PCR檢測RNA陰性[臨床意義]抗體陽性結(jié)果表明曾感染過SARS－CoV，由陰性到陽性的血清轉(zhuǎn)化，或者，急性期到恢復(fù)期抗體效價增高4倍以上，表明有近期感染；PCR陽性可表示標本中有SARS－CoV的遺傳物質(zhì)（RNA）。,三、寄生蟲感染免疫檢測(一)弓形蟲抗體和DNA測定弓形蟲感染為人畜共患性疾病，可引起中樞神經(jīng)系統(tǒng)

55、和眼的病變，也可引起流產(chǎn)和先天畸形等。[參考值]IgG和IgM均陰性(間接血凝試驗、IFA法和ELISA法)；DNA陰性(PCR法和DNA雜交技術(shù))[臨床意義]IgM升高是近期感染的指標；IgG增高是既往感染的指標；雙份血清IgG抗體滴度4倍以上增高或單份血清IgG滴度≥1：512，提示近期感染可能性大。,二)囊蟲抗體測定囊蟲病是一種人和豬共患的寄生蟲病。[參考值]①ELISA法：血清低于1：64為陰性；腦脊液低于1：8為陰性

56、②間接血凝法：血清低于1：128為陰性；腦脊液低于1：8為陰性。[臨床意義]IgG陽性見于囊蟲病，可用作流行病學調(diào)查。 細菌寄生蟲形態(tài)及檢測,四、性傳播疾病免疫檢測 性傳播疾病近年在我國的發(fā)病率呈上升趨勢，多由衣原體、支原體、梅毒螺旋體、淋球菌、人獲得性免疫缺陷病毒引起。(一)衣原休抗體測定衣原體包括沙眼衣原體、鸚鵡熱衣原體和肺炎衣原體三種，其中沙眼衣原體(CT)是引起性傳播疾病常見的病原體之一。[參考值]IF

57、A法IGM效價<l：32，IgG效價＜1:512。[臨床意義]①IgM陽性提示近期有CT感染，有利于早期診斷；②IgG在發(fā)病后6－8周出現(xiàn)，持續(xù)時間較長；提示曾有過CT感染,(二)支原體的血清學檢測 對人致病的主要有肺炎支原體、解脲人原體、人型支原體和生殖道支原體。[參考值]補體結(jié)合試驗：效價＜1：64；間接血凝試驗：陰性[臨床意義]單份血清效價＞1：64－128者或雙份血清有4倍以上增長者，有診斷意義。間接血凝試驗的敏

58、感性高于補體結(jié)合試驗，感染發(fā)病后7天出現(xiàn)陽性。,(三)梅毒螺旋體抗體測定 梅毒螺旋體侵入人體后，在血清中除可出現(xiàn)特異性抗體外，還可出現(xiàn)非特異性抗體(反應(yīng)素)。[參考值]檢測非特異性抗體的定性試驗：快速血漿反應(yīng)素試驗(RPR)陰性；不加熱血清反應(yīng)素試驗(USR)陰性；性病研究實驗室試驗(VDRL)陰性；檢測梅毒螺旋體的特異性抗體的確診試驗：梅毒螺旋體血凝試驗(TPHA)和熒光螺旋體抗體吸收試驗(FTA－ABS)均陰性。,[臨床意義]

59、梅毒螺旋體反應(yīng)素試驗敏感性高；定性試驗陽性的情況下，必須進行確診試驗，若陽性可確診梅毒。(四)淋球菌血清學測定及DNA測定[參考值]協(xié)同凝集試驗陰性；PCR定量試驗陰性[臨床意義]協(xié)同凝集試驗特異性強、敏感性高且操作簡便；PCR可做確診試驗。hhug,(五)人獲得性免疫缺陷病毒抗體及RNA測定人獲得性免疫缺陷病毒(HIV)是艾滋病(AIDS)的病原體。[參考值]①篩選試驗：ELISA法和快速蛋白印跡法(RWB)均為陰性；②確診

60、試驗：蛋白印跡試驗(WB)和 RT－PCR法 RNA均陰性。[臨床意義]篩選試驗靈敏度高，但特異性不高，故有假陽性；所以篩選試驗陽性時應(yīng)用確診試驗證實。確診試驗陽性，特別是RT－PCR法檢測HIV－RNA陽性，對肯定診斷和早期診斷頗有價值。,第七節(jié) 其他免疫檢測,一、循環(huán)免疫復(fù)合物檢驗 二、冷球蛋白檢測 三、C-反應(yīng)蛋白檢測 四、特異性IgE檢測,三C-反應(yīng)蛋白檢測,C-反應(yīng)蛋白﹙C-reactive protein，CR

61、P﹚是一種由肝臟合成的，能與肺炎雙球菌細胞壁C-多糖起反應(yīng)的急性時相反應(yīng)蛋白。 CRP不僅能結(jié)合多種細菌、真菌及原蟲等體內(nèi)的多糖物質(zhì)，在鈣離子存在的情況下，還可以結(jié)合卵磷脂和核酸等，有激活補體、促進吞噬和調(diào)節(jié)免疫作用。廣泛存在于血清和其他體液中。,【原理 】抗原抗體結(jié)合形成復(fù)合物，在一定介質(zhì)條件下產(chǎn)生濁度，當光通過時發(fā)生散射，根據(jù)散射強度判定待測物質(zhì)含量。 【參考值 】＜2.87mg/L﹙速率散射比濁法﹚ 【臨床意義 】CRP是急性時

62、相反應(yīng)極靈敏的指標①CRP升高：見于化膿性感染、組織壞死（心機梗死、嚴重創(chuàng)傷、大手術(shù)、燒傷）、惡性腫瘤、結(jié)羝組織病、器官移植、急性排斥。②鑒別細菌性和非細菌性感染；前者CRP升高，后者不升高,Ig的基本結(jié)構(gòu) ( 單體 ),抗體的酶解片段,圖3 SIgA 二聚體,IgM 五聚體,粉螨,抗體的生物學活性,著絲點型 胞漿型,均質(zhì)型 斑點型,核仁型,風濕病患者血中的抗核抗體,抗核抗體抗雙鏈DNA