急性毒性實(shí)驗(yàn)終結(jié)版

1、急性毒性試驗(yàn),－LD50 與LC50 的測(cè)定,急性毒性試驗(yàn),實(shí)驗(yàn)?zāi)康募耙饬x：確定受試物的半數(shù)致死劑量LD50/LC50、觀察受試物所致的急性中毒癥狀及其毒性作用特點(diǎn)，為進(jìn)一步的毒性試驗(yàn)提供重要的參考依據(jù)。急性毒性試驗(yàn)的染毒方式可有多種，包括經(jīng)口、經(jīng)呼吸道、經(jīng)皮及注射染毒方式等。,經(jīng)口急性毒性試驗(yàn)（LD50）,試驗(yàn)?zāi)康?學(xué)習(xí)急性毒性試驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)原則 熟練掌握經(jīng)口灌胃染毒操作技術(shù) 掌握LD50計(jì)算方法和急性毒性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)

2、試驗(yàn)內(nèi)容 動(dòng)物選擇和性別鑒定 稱(chēng)重、編號(hào)和隨機(jī)分組 小鼠經(jīng)口灌胃操作技術(shù) 毒性癥狀觀察、LD50計(jì)算和毒性分級(jí),操作步驟 動(dòng)物選擇及性別辨認(rèn) 急性毒性實(shí)驗(yàn)一般首選哺乳動(dòng)物，其中又以大小鼠最為常用。大、小鼠主要依據(jù)肛門(mén)與生殖器之間的距離來(lái)區(qū)分。遠(yuǎn)——♂、近——♀。成年鼠：雄性臥位可見(jiàn)睪丸，雌性可見(jiàn)腹部有12個(gè)乳頭。 動(dòng)物稱(chēng)重、編號(hào)和隨機(jī)分組應(yīng)依據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)原則進(jìn)行隨機(jī)分組。,,,,,,,,,1,2,3,4,5,

3、6,7,8,9,,,受試物劑量選擇 對(duì)于一種新的化學(xué)物質(zhì)，劑量選擇可參照同系物的毒性或文獻(xiàn)資料加以估計(jì)，先用少量動(dòng)物以組距較大的一系列劑量進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，找出粗略的致死劑量范圍，然后再設(shè)計(jì)出正式實(shí)驗(yàn)劑量組受試物配制本次試驗(yàn)所用的受試物是80％的敵敵畏(DDVP)原液。按照事先設(shè)計(jì)的劑量分別稀釋配制為幾種不同濃度的受試物溶液，而各個(gè)劑量組的動(dòng)物均給予相同單位體重體積的受試化學(xué)物。,劑量mg/kg 原液量(g

4、) 原液量(ml) 定容量(ml) 原液量 (ml) 36.44 0.1139 0.0813 50 0.0948 51.02 0.1594 0.113

5、9 50 0.1327 71.43 0.2232 0.1594 50 0.1858 100 0.3125 0.2232 50 0.2603

6、 140 0.4375 0.3125 50 0.3642 196 0.6125 0.4375 50 0.5099,,,,敵敵畏（DDVP）配制：（組距1.4，給藥量0.2ml/10g）,（4℃）,（25

7、℃ ）,灌胃操作將動(dòng)物固定成垂直體位，腹部面向操作者，使動(dòng)物的上消化道固定成一直線毒性作用/中毒癥狀和動(dòng)物死亡情況觀察高劑量組動(dòng)物的死亡常很快發(fā)生，染毒后應(yīng)即刻密切觀 察。觀察和記錄中毒癥狀及出現(xiàn)的時(shí)間，死亡數(shù)量和時(shí)間及死亡前的特征。按照實(shí)驗(yàn)結(jié)果，填寫(xiě)急性毒性實(shí)驗(yàn)記錄表。中毒的癥狀觀察：興奮、流涎、肌震顫、抽搐、管狀尾、呼吸減慢、呼吸困難、四肢無(wú)力、站立不穩(wěn)、大小便失禁、大劑量側(cè)臥以致死亡。,改進(jìn)寇氏法是利用劑量對(duì)數(shù)

8、與死亡率呈S型曲線而設(shè)計(jì)的方法，又稱(chēng)Karber法或平均致死量法。本法要求每個(gè)染毒劑量組動(dòng)物數(shù)要相同，各劑量組組距呈等比級(jí)數(shù)，死亡率呈正態(tài)分布，最低劑量組死亡率呈80%。,LD50計(jì)算（改良寇氏法）,根據(jù)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中毒癥狀、死亡時(shí)間、特征和LD50，按受試物種類(lèi)，分別參照相應(yīng)的經(jīng)口急性毒性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評(píng)定，判斷該受試物的毒性大小及毒性特征。,毒性分級(jí)及結(jié)果評(píng)定,,健康成年小鼠若干只（按每組5~6人，每組10只動(dòng)物，♂♀各半）、50 ml容

9、量瓶(每組1個(gè))、加樣器（200μl、1000μl）、加樣槍頭、DDVP原液、1 ml玻璃注射器、灌胃針頭（每組2套）、棉簽、染液、LD50記錄紙、小鼠籠（每組2個(gè)）、電子天平（2臺(tái)）、搪瓷托盤(pán)（每組一個(gè)）、受試物、苦味酸酒精飽和液、0.5%品紅溶液或其它染色劑。,實(shí)驗(yàn)課所需準(zhǔn)備的試劑和材料：,經(jīng)呼吸道急性毒性試驗(yàn)（LC50）,實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶W(xué)習(xí)靜式呼吸道染毒操作方法 學(xué)習(xí)測(cè)定和計(jì)算LC50的試驗(yàn)步驟和方法。實(shí)驗(yàn)原理（染毒方式）

10、 呼吸道吸入染毒可分為兩種方式，一種是動(dòng)式吸入，一種是靜式吸入。,靜式呼吸道吸入染毒： 優(yōu)點(diǎn)：設(shè)備簡(jiǎn)單、操作方便、消耗受試物少、適用于小動(dòng)物 接觸易揮發(fā)液 態(tài)化合物的急性毒性研究。 缺點(diǎn)：受試物濃度難維持恒定，而且實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有經(jīng)皮吸收的 可能。動(dòng)式吸入： 優(yōu)點(diǎn)：能即時(shí)補(bǔ)入新鮮空氣和排出污濁空氣，氧分壓，二氧 化

11、碳分壓，溫度、濕度，受試物濃度保持恒定。 缺點(diǎn)：設(shè)備復(fù)雜，消耗受試物多、易污染環(huán)境,染毒柜內(nèi)受試物濃度的計(jì)算,注意單位！,,,,試劑和材料 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及器材 健康成年小鼠若干只，（每組10只，♂♀各半），小鼠籠（每組2個(gè)）。靜式吸入染毒柜6個(gè)、吸管、動(dòng)物秤、記錄紙。 試劑 受試物（易揮發(fā)液體，苯（原液））、苦味酸酒精飽和液、0.5%品紅溶液或其他染色劑。,操作步驟 選擇健康實(shí)驗(yàn)動(dòng)

12、物，稱(chēng)重（精確到0.1g），編號(hào)，隨機(jī)分組。劑量分組,呼吸道吸入染毒： 依設(shè)計(jì)劑量濃度及染毒柜體積，計(jì)算需要加入的受試物量。將5♂、5♀共10只小鼠→放入靜式染毒柜內(nèi)→加蓋（注：每只小鼠每小時(shí)所需要的氣積為3L）。將液態(tài)受試物經(jīng)加藥孔加到接物蒸發(fā)器（紗布、濾紙、蒸發(fā)皿或小型加熱器）上→開(kāi)啟小電扇，計(jì)時(shí)→觀察、記錄中毒癥狀和動(dòng)物死亡情況。染毒結(jié)束后，關(guān)閉電源，打開(kāi)蓋子，驅(qū)走柜內(nèi)殘存的含毒空氣，取出動(dòng)物，存活者歸籠繼續(xù)觀察。

13、（癥狀：嘔吐、昏迷、抽搐、呼吸麻痹而死亡） LC50計(jì)算：同LD50,急性毒性試驗(yàn)的觀察和記錄內(nèi)容主要包括4個(gè)方面：中毒體征及發(fā)生過(guò)程、死亡情況和時(shí)間分布、體重和病理形態(tài)學(xué)變化。觀察和記錄中毒癥狀及出現(xiàn)的時(shí)間，死亡數(shù)量和時(shí)間及死亡前的特征。急性毒性試驗(yàn)觀察周期一般為14天，LD50或LC50計(jì)算時(shí)以觀察周期內(nèi)各組動(dòng)物的總死亡數(shù)為依據(jù)。根據(jù)觀察情況分析中毒特點(diǎn)和毒作用靶器官。按照實(shí)驗(yàn)結(jié)果，填寫(xiě)急性毒性實(shí)驗(yàn)記錄表。,中毒癥狀和動(dòng)物死亡

14、情況觀察,結(jié)果評(píng)定/結(jié)果評(píng)價(jià) 依據(jù)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中毒癥狀、死亡時(shí)間、LC50及急性毒作用帶，參考相應(yīng)的急性毒性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，評(píng)價(jià)毒物的急性毒性強(qiáng)弱，判斷該受試物的毒性大小及其毒性特征。,,實(shí)驗(yàn)報(bào)告,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的種屬、品系、性別及來(lái)源。實(shí)驗(yàn)前動(dòng)物禁食和健康狀況。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體重和隨機(jī)分組情況。受試物的名稱(chēng)、來(lái)源、純度、性狀等情況。詳細(xì)描述實(shí)驗(yàn)觀察的中毒表現(xiàn)和死亡情況等。 LD50/LC50的計(jì)算方法和結(jié)果。 受試物的毒性