生物科學(xué)畢業(yè)論文碳源對黔莓ⅰ號組織培養(yǎng)的影響

1、<p><b>　　本科畢業(yè)論文</b></p><p><b>　?。?0 屆）</b></p><p>　　碳源對黔莓Ⅰ號組織培養(yǎng)的影響</p><p>　　所在學(xué)院 </p><p>　　專業(yè)班級 生物科學(xué)

2、 </p><p>　　學(xué)生姓名 學(xué)號 </p><p>　　指導(dǎo)教師 職稱 </p><p>　　完成日期 年 月 </p><p><b>　　目 錄</b>&l

3、t;/p><p><b>　　摘要：III</b></p><p><b>　　關(guān)鍵詞：III</b></p><p>　　Abstract:III</p><p>　　Keywords:III</p><p><b>　　1 前言1</b><

4、;/p><p><b>　　2 材料與方法2</b></p><p>　　2.1 材料、器材、藥品2</p><p><b>　　2.2 方法2</b></p><p>　　2.2.1培養(yǎng)基的配制2</p><p><b>　　2.2.2滅菌4</b&g

5、t;</p><p>　　2.2.3開啟無菌操作臺中的紫外滅菌燈4</p><p>　　2.2.4準(zhǔn)備試驗材料4</p><p><b>　　2.2.5接種5</b></p><p><b>　　3 結(jié)果與分析6</b></p><p>　　3.1 污染原因分析7&

6、lt;/p><p>　　3.2 造成褐化的原因分析7</p><p>　　3.3 結(jié)論7.8</p><p><b>　　參考文獻：9</b></p><p><b>　　致謝：10</b></p><p>　　碳源對黔莓Ⅰ號組織培養(yǎng)的影響</p><

7、p><b>　　摘要：</b></p><p>　　選擇適合黔莓I號離體快繁的最佳碳源。以黔莓I號的幼嫩的芽作為試驗材料，采用MS培養(yǎng)基對其進行組織培養(yǎng)，觀察并記錄愈傷組織的分化狀況，計算誘導(dǎo)率。ＭＳ培養(yǎng)基,為蔗糖碳源最適合黔莓I號離體快繁，葡萄糖其次，以果糖為碳源的效果最不明顯。</p><p><b>　　關(guān)鍵詞：</b></p&

8、gt;<p>　　黔莓I號；離體快繁；誘導(dǎo)率。</p><p><b>　　Abstract:</b></p><p>　　the best carbon source for Guizhou berry I rapid propagation in vitro. Taking the berry I tender buds as the test ma

9、terial, with MS culture medium for tissue culture on the differentiation status, observe and record the callus induction rate, calculation. MS medium, sucrose as carbon source for the BlackBerry I, micropropagation, gluc

10、ose and fructose as carbon source, the effect is not obvious.</p><p><b>　　Keywords:</b></p><p>　　Guizhou berry I; rapid propagation in vitro; induction rate。</p><p><

11、;b>　　1 前言</b></p><p><b>　　1.1草莓簡介</b></p><p>　　草莓(Strawberry)又叫紅莓、洋莓、地莓等，是一種紅色的水果。是薔薇科植物，食用的草莓是該種植物的花托膨大了的漿果，其真正的果實是花托表面那些細(xì)小的顆粒，屬多年生草本植物，花白色。原產(chǎn)南美、歐洲等地，我國各地都有草莓栽培，也有野生的。每年5-6

12、月間果實成熟時采摘。不過現(xiàn)在都是冬季上市，因為都是大棚栽種的反季節(jié)水果。草莓的外觀呈心形，鮮美紅嫩，果肉多汁，含有特殊的濃郁水果芳香。草莓營養(yǎng)價值高，含豐富維生素C，有幫助消化的功效，與此同時，草莓還可以鞏固齒齦，清新口氣，潤澤喉部。草莓功效作用:a.草莓中所含的胡蘿卜素是合成維生素A的重要物質(zhì)，具有明目養(yǎng)肝作用.b.草莓對胃腸道和貧血均有一定的滋補調(diào)理作用。c.草莓除可以預(yù)防壞血病外，對防治動脈硬化，冠心病也有較好的療效。d.草莓是鞣

13、酸含量豐富的植物，在體內(nèi)可吸附和阻止致癌化學(xué)物質(zhì)的吸收，具有防癌作用. </p><p>　　除此之外：草莓還有較高的藥用和醫(yī)療價值。從草莓植株中提取出的“草莓胺”，治療白血病、障礙性貧血等血液病有較好的療效。草莓味甘酸、性涼、無毒，能潤、生津、利痰、健脾、解酒、補血、化脂，對腸胃病和心血管病有一定防治作用。據(jù)記載，服飲鮮草莓汁可治咽喉腫痛、聲音嘶啞癥。食草莓劃，對積食脹痛、胃口不佳、營養(yǎng)不良或病后體弱消瘦，是極

14、為有益的。在廣州一帶有一種野生地錦草莓，當(dāng)?shù)厝藢⑵淝o葉搗碎用來敷療瘡有特效，敷蛇咬、燙傷、燒傷等也很奏效。草莓汁還有滋潤營養(yǎng)皮膚的功效，用它制成各種高級美容霜，對減緩皮膚出現(xiàn)皺紋有顯著效果。</p><p>　　據(jù)測定，每100克草莓果肉中含糖8至9克、蛋白質(zhì)0.4至0.6克，維生素C 50至100毫克，比蘋果、葡萄高7到10倍。而它的蘋果酸、檸檬酸、維生素B1、維生素B12，以及胡蘿卜素、鈣、磷、鐵的

15、含量也比蘋果、梨、葡萄高3到4倍。臺灣人把草莓稱為“活的維生素丸”，德國人把草莓譽為“神奇之果”，可見是不無道理的。</p><p>　　而本次實驗采用的黔莓I號，是貴州省園藝研究所于2005年以章姬為母本，法蘭帝為父本進行常規(guī)雜交，2006年從雜交實生苗中選擇表現(xiàn)優(yōu)良的株系，經(jīng)系統(tǒng)選育而成．黔莓Ｉ號屬早熟品種。生長勢強，分蘗性中等，匍匐莖發(fā)生容易。葉大近圓形，綠色，托葉淺紅，無葉耳?；ㄐ蜻B續(xù)抽生性好，粗壯，梗長

16、，花朵大，白色，兩性花，花數(shù)8～12枚，雄蕊19～22枚，花萼雙層，宿萼綠色，主萼平離副萼反卷，萼心凹陷，除萼容易。果實圓錐形，紅色，光澤好，果肉橙紅色，髓心白色、小，果實完熟后髓心略有空洞，果尖著色易，萼下著色較慢，種子黃綠色，凹陷。果肉質(zhì)地韌，味清香，風(fēng)味酸甜適口。單果重26.4克，單株產(chǎn)量290.4克。耐寒性、耐熱性及耐旱性較強。品質(zhì)：可溶性固形物含量9.9%，糖含量7.78%，可滴定酸0.45%，Vc含量92.34mg/100g

17、，果實硬度較好，儲運性較好。</p><p><b>　　1.2研究前景</b></p><p>　　植物組培技術(shù)是為了快速繁殖幼苗的一項先進的的科學(xué)技術(shù),以及為了防止種苗繁育上長期采用營養(yǎng)繁殖致使病毒不斷積累導(dǎo)致草莓產(chǎn)量降低、品質(zhì)變劣等退化現(xiàn)象，且一旦感染病毒便會代代相傳，另外，植物病毒不僅對作物產(chǎn)量、品質(zhì)有嚴(yán)重的影響，同時影響植物材料的國際交流【11】草莓也是如此

18、，因此，培育和應(yīng)用脫毒技術(shù)是改善草莓品質(zhì)、提高產(chǎn)量的有效途【4】。植物組織培養(yǎng)技術(shù)是為解決科學(xué)研究和生產(chǎn)實踐中的問題而生產(chǎn)【3】。草莓株型矮小，在建園和品種更新時，需要大量的幼苗【1】。目前，國內(nèi)尾巴植物組織普遍應(yīng)用于作物育種，并在單倍體育種，胚胎育種，細(xì)胞融合育種、細(xì)胞突變育種、基因工程育種方面取得了較大進展【13】。</p><p>　　1.3研究的目的與意義</p><p>　　研究

19、的目的:研究不同碳源（麥芽糖、蔗糖、葡萄糖）在‘黔莓I號’草莓組織培養(yǎng)過程中對外植體的影響。從而篩選出最適合與‘黔莓I號’草莓組織培養(yǎng)的碳源。以及在‘黔莓I號’草莓植物組織培養(yǎng)，哪一種碳源更容易培養(yǎng)，存活率最高，便于在植物育種上的選擇，從而為‘黔莓I號’草莓乃至其他植物組織培養(yǎng)的碳源選擇提供依據(jù)。</p><p><b>　　意義：</b></p><p>　　植物組

20、培技術(shù)主要用于良種快速繁殖，大批量快速繁殖繁殖，植物脫毒和稀缺特殊種的繁育。植物組培技術(shù)的優(yōu)點就是可以獲得無病毒植株，可以快速繁殖下一代，保持親本優(yōu)良性狀，而且還可以應(yīng)用于大規(guī)模生產(chǎn)。MS培養(yǎng)基中不同碳源的篩選有利于為草莓的資質(zhì)培養(yǎng)提供科學(xué)的數(shù)據(jù)，有利于對草莓新品種的研究和開發(fā)。為提高廣大草莓種植的經(jīng)濟效益做出重要貢獻。</p><p><b>　　2 材料與方法</b></p>

21、<p>　　2.1 材料、器材、藥品</p><p>　　材料：生長健壯、幼嫩、無病蟲害的黔莓Ｉ號幼嫩的芽。本試驗所用黔莓Ｉ號的植株來自貴州省凱里市麻江縣草莓種植戶，2012年7月、8月、9月各采集一次，現(xiàn)采現(xiàn)用。</p><p>　　器材：燒杯（50ml、100ml、200ml、250ml、500ml、1000ml）、容量瓶（50ml、100ml、500ml、1000ml）

22、、試管、錐形瓶、培養(yǎng)瓶、玻璃棒、培養(yǎng)皿、酒精燈、接種鉗、手持噴霧器、解剖針、解剖刀、移液管、移液槍、高壓蒸汽滅菌鍋、光照培養(yǎng)箱、PH儀等。</p><p><b>　　藥品：</b></p><p>　　大量元素：硝酸鉀（KNO3）、 硝酸銨(NH4NO3)、 磷酸二氫鉀(KH2PO4)、硫酸鎂 (MgSO4.7H2O) 、氯化鈣(CaCl2.2H2O) 。</

23、p><p>　　微量元素：碘化鉀(KI)、 硼酸(H3BO3)、 硫酸鋅(ZnSO4.7 H2O)、鉬酸鈉（Na2MoO4.2 H2O）、硫酸銅 (CuSO4.5 H2O)、氯化鈷(CoCl2·6H2O) 鐵鹽：乙二胺四乙酸二鈉(Na2.EDTA) 、硫酸亞鐵(FeSO4.7H2O)。</p><p>　　有機成分：肌醇 、甘氨酸 、鹽酸硫胺素(V

24、B1）、鹽酸吡哆醇 (VB6）  煙酸 、蔗糖、瓊脂、果糖、葡萄糖。</p><p><b>　　2.2 方法</b></p><p>　　2.2.1培養(yǎng)基的配制</p><p>　　按照表1中的配方分別配制MS培養(yǎng)基（除了表1 中的配方外，還需加入NAA0.5mg/L 、6-BA0.5mg/L、瓊脂6g/L）即MS+NAA0.5mg

25、/L+6-BA0.5mg/L+瓊脂6g/L。然后分別加入不同碳源(果糖、蔗糖、葡萄糖)．由于要稱量藥品較多，而且有些藥品稱量的量極少，為了減少麻煩，為了今后的試驗更加方便快捷地進行，可以先各自配制三種培養(yǎng)基的母液（母液中先不加CaCl2·2H2O和激素，配制培養(yǎng)基時再加。除此之外，需加熱溶解的藥品要加熱溶解，配好的母液必須清澈透明才能使用），然后，將配制好的母液保存于冰柜冷藏室中,當(dāng)需要配制培養(yǎng)基時，取用適量的母液來稀釋即可。

26、</p><p>　　表一 MS培養(yǎng)基配制一覽表</p><p><b>　　2.2.2滅菌</b></p><p>　　將配制好的培養(yǎng)基分裝到培養(yǎng)瓶中（30mL/瓶），準(zhǔn)備1000mL大燒杯2個，500mL大燒杯3個，大培養(yǎng)皿2個，玻璃棒1根，槍形鑷2把，解剖刀1把，濾紙15張，1000mL用廣口瓶裝好的蒸餾水，分別用報紙和橡皮筋包扎好后，整

27、齊規(guī)范地放入高壓蒸汽滅菌鍋中，121oC、1.01Pa滅菌20min。</p><p>　　2.2.3開啟無菌操作臺中的紫外滅菌燈</p><p>　　在接種前，用75%的酒精噴灑操作臺四周及操作臺內(nèi)部，并用酒精棉球擦拭一遍，將裝有75%酒精棉球的試劑瓶一個，裝有75%的酒精試劑瓶一個，裝有0.1%升汞的試劑瓶一個，酒精燈一盞，打火機1個，放入操作臺，把操作臺的門關(guān)上，打開紫外燈，并把風(fēng)速

28、調(diào)到最大，消毒20min。</p><p>　　2.2.4準(zhǔn)備試驗材料</p><p>　　外植體的選?。簬а壳o段，選取健壯無病蟲害幼莖為外植體【15】。將黔莓I號幼嫩的芽洗潔精輕輕洗一遍，用大量自來水沖洗數(shù)遍，瀝干水備用。</p><p><b>　　2.2.5接種</b></p><p>　　穿上無菌服，用酒精噴灑雙

29、手后將已滅好菌的培養(yǎng)基等物品在關(guān)閉紫外燈的情況下放入無菌操作臺，再打開紫外燈接著滅菌10min，之后關(guān)掉紫外燈，風(fēng)機依然開到最大，等培養(yǎng)基和無菌水冷卻后開始接種。用75%酒精噴灑完雙手后把已經(jīng)洗凈瀝干水黔莓I號幼嫩的芽的放入操作臺上的燒杯中，用75%的酒精消毒10~30s用無菌水沖洗5次后，用0.1%的升汞溶液消毒10min，之后用無菌水沖洗8次，瀝干水后放入墊有無菌濾紙的培養(yǎng)皿中，在酒精燈旁把黔莓I號幼嫩的芽切成0.5mm2大小的，用

30、槍形鑷接種到培養(yǎng)瓶中，每瓶接種4片，每接種一次，槍形鑷在酒精燈上灼燒一次，接種要注意在酒精燈旁操作，且要將瓶蓋在酒精燈上繞一圈以便最大程度地滅菌。3種培養(yǎng)基上分別接種了黔莓Ｉ號幼嫩的芽120片。接種完成后，將培養(yǎng)基放入恒溫箱中觀察，在培養(yǎng)過程中，溫度是構(gòu)成組培微環(huán)境重要環(huán)境因子【8】,溫度過低生長緩慢甚至完全停止,溫度一旦正常又恢復(fù)生長;溫度過高,也會使生長速下降【2】。因此在組織苗培養(yǎng)過程中，溫度的控制也是一個重要的環(huán)節(jié)。溫度調(diào)節(jié)在正

31、常的范圍。另外，光照也是影響組培微環(huán)境的重要因素之一，此外，在培養(yǎng)過程中，光照的控制對許多植物中</p><p>　　表二 試驗觀察及數(shù)據(jù)統(tǒng)計</p><p>　　注：以上試驗重復(fù)三次。數(shù)據(jù)記錄從接種第三天開始，每天觀察一次，記錄被污染的瓶數(shù)及誘導(dǎo)出的愈傷組織數(shù)。</p><p>　　統(tǒng)計方法：污染率及誘導(dǎo)率的計算如下：</p><p>　　

32、污染率=污染瓶數(shù)/總瓶數(shù)</p><p>　　誘導(dǎo)率=誘導(dǎo)的葉片數(shù)/總的葉片數(shù)</p><p><b>　　3 結(jié)果與分析</b></p><p>　　3.1 污染原因分析</p><p>　　眾所周知，組培過程中的污染，主要表現(xiàn)為培養(yǎng)基的污染，營養(yǎng)豐富的培養(yǎng)基為細(xì)菌、真菌提供了適宜的滋生場所【6】。另外，外植體污染也是

33、很常見的問題：主要表現(xiàn)為：（1）、是培養(yǎng)材料內(nèi)部滅菌效果不好（占1/3-1/2）【7】。外植體材料帶菌多，在表面消毒過程處理不到位，即殺菌劑使用不當(dāng)或處理時間不適，未能將所帶病菌全部殺死而導(dǎo)致接種后病菌在培養(yǎng)基中擴大繁衍。因此,選擇生長健壯,帶病菌少的外植體是很重要的【9】。（2）、操作器具帶菌操作器械，器皿，包括鑷子、剪子、刀片、三角瓶，培養(yǎng)皿、瓶塞、超凈工作臺、酒精燈等凡接種時可能用到的一切器具未經(jīng)過嚴(yán)格的高溫滅菌或滅菌過程有問題時

34、，則會出現(xiàn)污染，另外就是器械在滅菌后取放過程中不慎帶菌也會造成污染。（3）培養(yǎng)基污染滅菌好的空白培養(yǎng)基有時也會出現(xiàn)污染。若是菌落且只存在于培養(yǎng)基表面，則有可能是瓶塞不嚴(yán)或扎口不緊和放置培養(yǎng)基的地方空氣環(huán)境中病菌孢子過多所致。若是白色云霧狀物且出現(xiàn)在培養(yǎng)基內(nèi)部，則表明培養(yǎng)基在滅菌過程中時間不夠或氣壓不夠所致的滅菌不徹底。（4）、培養(yǎng)基中的糖也會引起污染。因此，在傳統(tǒng)的培養(yǎng)基中，通常采用容積較小的培養(yǎng)容器以降低培養(yǎng)基中糖引起的污染【<

35、/p><p>　　3.2 造成褐化的原因分析</p><p>　　褐化是由于植物體內(nèi)的酚類物質(zhì)在組培是切割導(dǎo)致和空氣中的氧氣所發(fā)生氧化反映生成醌類物質(zhì)，這種醌類物質(zhì)分泌到植株體外。影響植物組織培養(yǎng)褐變的因子是復(fù)雜的，隨植物種類、基因型、外植體部位及生理狀態(tài)等的不同，褐變的程度也有所不同【5】褐化嚴(yán)重的會導(dǎo)致植株死亡，在接種過程中，由于切割導(dǎo)致褐化這一現(xiàn)象較為嚴(yán)重，因為在接種的時，莖節(jié)需要兩面切

36、割才能接種，所以損傷比較大，褐化就比較多，如要使用它作為外植體，需要改進操作，避免切割造成的損傷，降低褐化率。</p><p><b>　　3.3 結(jié)論</b></p><p>　　在本次植物組織培養(yǎng)的實驗中，用不同的碳源（果糖、蔗糖、麥芽糖）來進行植物組織培養(yǎng)效果是不一樣的，不同的碳源對黔莓I號幼嫩的芽作為外植體的影響也是是不一樣的。我們選擇從三個不同的碳源（果糖、

37、蔗糖、麥芽糖）中，篩選出適合外植體黔莓I號幼嫩的芽做植物組培培養(yǎng)的碳源，從實驗得到的數(shù)據(jù)分析得到：用蔗糖做黔莓I號組織培養(yǎng)的碳源，容易存活，易于生長，污染率也相對較低；用葡萄糖作為黔莓I號組織培養(yǎng)的碳源，存活數(shù)居中，不突出；用果糖作為黔莓I號組織培養(yǎng)的碳源，污染率高，培養(yǎng)基松散，死亡率偏高。因此，從本次試驗結(jié)果表明，在這三種碳源（果糖、蔗糖、麥芽糖中，蔗糖較其他兩種碳源來講，是最適合于黔莓I號組織培養(yǎng)的碳源。</p>&l

38、t;p><b>　　參考文獻：</b></p><p>　　[1] 郭延平. 草莓離體試管苗光合作用的研究[ J] . 果樹科學(xué), 2000, 17（3）</p><p>　　[2] 查仁明;蘋果屬植物組織培養(yǎng)快速繁殖技術(shù);青海農(nóng)林科技（實用技術(shù)與科普）;2001年第1期.</p><p>　　[3] 伊華林.我國經(jīng)濟植物組織培養(yǎng)概況.湖

39、北農(nóng)學(xué)院學(xué)報,第21卷第3期.2001</p><p>　　[4] 趙佐敏, 艾勇.草莓脫毒技術(shù)的研究及應(yīng)用進展.貴州農(nóng)業(yè)科學(xué).2001,29(6):50～52 </p><p>　　[5] 崔堂兵,郭勇,張長遠(yuǎn).植物組織培養(yǎng)中褐變現(xiàn)象的產(chǎn)生機理及克服方法.廣東農(nóng)業(yè)科學(xué)2001年第3期.</p><p>　　[6] 崔剛,單文修,秦旭,孫仲序.植物開放式組織培養(yǎng)研究

40、初探.山東農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版),2004,35(4)</p><p>　　[7] 梁稱福.植物組織培養(yǎng)研究進展與應(yīng)用概況.經(jīng)濟林研究2005,23(4):99-105 </p><p>　　[8] 吳沿友,劉建,李國祥,夏利利,李西騰.植物組織培養(yǎng)育苗微生態(tài)環(huán)境控制的研究進展.江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)2006年第4期.</p><p>　　[9] 邵龍珠,趙淑君,王淑榮,

41、劉金華.植物組織培養(yǎng)中的常見問題與解決技術(shù)措施.林業(yè)勘查設(shè)計(總161期)2012年第1期 </p><p>　　[10] 李盟,高亦珂.植物組織培養(yǎng)新技術(shù)研究進展.廣東農(nóng)業(yè)科學(xué)2009年第3期</p><p>　　[11] 肖哲麗,柳金鳳.植物組織培養(yǎng)的研究進展及新技術(shù)應(yīng)用.寧夏農(nóng)林科技.2011,52(01)</p><p>　　[12] 谷艾素,張歡,崔瑾.光

42、調(diào)控在植物組織培養(yǎng)中的應(yīng)用研究進展.西北植物學(xué)報.2011,31(11).[13] 張東旭,周增產(chǎn),卜云龍,張潔,張曉文,張成波.植物組織培養(yǎng)技術(shù)應(yīng)用研究進展.北方園藝2011(06):209~ 213</p><p>　　[14] 史俊.淺談植物組織培養(yǎng)實驗室的管理.中國科技信息2010年第4期 </p><p>　　[15] 花卉培養(yǎng)技術(shù)研究課題組.花卉植物組織培養(yǎng)技術(shù)研究.淄博師專

43、學(xué)報.2011年第1期</p><p><b>　　致謝：</b></p><p>　　本次論文能夠順利的完成，首先，我要感謝的是我的論文指導(dǎo)老師-----任老師，在本次論文的實驗和在論文的撰寫過程中，任老師給與了我很大的幫助，使我在實驗過程中學(xué)到了很多東西，此外，我還得感謝余磊同學(xué)和宋小念同學(xué)，因為在這過程中，我們互相幫助，及時解決困難，在學(xué)習(xí)的過程中也有不少的樂趣