腸道益生菌對凡納濱對蝦非特異性免疫功能和抗病力影響的研究.pdf

1、本論文通過養(yǎng)殖試驗和WSSV攻毒實驗分析了5株對蝦腸道益生菌對凡納濱對蝦非特異性免疫功能和抗病力的影響。研究分為4部分： 第一部分是在基礎(chǔ)飼料中分別添加0.1％美人魚發(fā)光桿菌滅活菌、1％美人魚發(fā)光桿菌滅活菌和0.1％美人魚發(fā)光桿菌活菌配制成三種免疫實驗飼料，以基礎(chǔ)飼料為空白對照組飼料，每處理設(shè)3個平行樣。對體質(zhì)量為（4.83±0.36）g的凡納濱對蝦進行為期20天的飼養(yǎng)實驗，分別在0、5、10、15和20d進行取樣，以血清中的酚

2、氧化酶活性（PO）、酸性磷酸酶（ACP）、堿性磷酸酶（AKP）、超氧化物歧化酶（SOD）和溶菌酶活性（UL）為免疫指標，探討了美人魚發(fā)光桿菌作為免疫制劑對凡納濱對蝦非特異性免疫效應(yīng)的影響；并在投喂免疫飼料后的第22d，按4.2g.kg-1體重的劑量，直接投喂對蝦白斑綜合征病毒（WhiteSpotSyndromeVirus，WSSV）病料，記錄WSSV感染14d內(nèi)凡納濱對蝦的累積死亡率。結(jié)果表明，美人魚發(fā)光桿菌對凡納濱對蝦血清中PO、AC

3、P、AKP、UL、SOD等活性有顯著或極顯著的影響（P<0.05或P<0.01），明顯提高了對蝦抵御WSSV感染的能力，其中0.1％美人魚發(fā)光桿菌活菌實驗組的抗病毒感染能力最強，WSSV感染14d內(nèi)累計死亡率為63.3％±5.8％，而對照組為96.7％±7.3％。實驗表明，在適宜范圍內(nèi)，美人魚發(fā)光桿菌在一定程度上能提高凡納濱對蝦非特異性免疫水平和增強抵抗疾病的能力，其作為對蝦免疫增強劑具有良好的應(yīng)用前景。 第二部分是在B組基礎(chǔ)飼

4、料中分別添加了0.1％和1％大黃魚弧菌滅活菌制劑和0.1％活菌配制成三種免疫實驗飼料；C組基礎(chǔ)飼料中分別添加了0.1％和1％鞘氨醇單胞菌滅活菌制劑和0.1％活菌配制成三種免疫實驗飼料；以基礎(chǔ)飼料為空白對照組飼料，每處理設(shè)3個平行樣。對凡納濱對蝦體長（11.00±1.18）cm，體質(zhì)量（12.12±0.36）g，進行為期20天的飼養(yǎng)實驗，分別在0、5、10、15和20d進行取樣，以血清中的酚氧化酶活性（PO）、酸性磷酸酶（ACP）、堿性磷

5、酸酶（AKP）、超氧化物歧化酶（SOD）和溶菌酶活性（UL）為免疫指標；并在投喂免疫飼料后的第22d，按4.2g.kg-1體重的劑量，直接投喂對蝦白斑綜合征病毒（WhiteSpotSyndromeVirus，WSSV）病料，記錄WSSV感染14d內(nèi)凡納濱對蝦的累積死亡率。結(jié)果表明，除了個別情況外，大黃魚弧菌和鞘氨醇單胞菌對凡納濱對蝦血清中PO、ACP、AKP、UL、SOD等活性有顯著或極顯著的影響（P<0.05），并且在飼料中兩種益生菌

6、后后，明顯提高了對蝦抵御WSSV感染的能力，其中兩種益生菌的0.1％活菌實驗組的抗病毒感染能力較強，WSSV感染14d內(nèi)累計死亡率分別為21.67％、45.00％，均顯著低于對照組（66.67％）的累積死亡率。 第三部分將兩株益生菌PC070573和LV060810分別添加在基礎(chǔ)飼料中，以0.1％和1％滅活菌及0.1％活菌添加配制成三種免疫飼料試驗組，并以基礎(chǔ)飼料為空白對照組，每處理設(shè)3個平行樣。對體質(zhì)量為（4.83±0.36）

7、g的凡納濱對蝦進行為期3周天的飼養(yǎng)試驗和兩周的WSSV攻毒試驗，每5d取樣1次，檢測凡納濱對蝦血清的溶菌酶、酚氧化酶、酸性磷酸酶、堿性磷酸酶、超氧化物歧化酶，探討兩株益生菌對凡納濱對蝦非特異性免疫的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：PC070573的三個免疫組中1％滅活菌組的各項免疫指標較高，LV060810的三個免疫組中0.1％活菌組的各項免疫指標較高；但免疫保護率前者遠遠高于后者。 第四部分是在凡納濱對蝦的基礎(chǔ)飼料中添加了0.1％和1％大黃魚

8、弧菌滅活菌制劑和0.1％活菌配制成三種免疫飼料試驗組，并以基礎(chǔ)飼料為空白對照組，每處理設(shè)3個平行樣。對凡納濱對蝦進行為期20天的飼養(yǎng)實驗，分別在0、5、10、15和20d進行取樣，以血清中先天免疫相關(guān)基因（Toll受體和熱休克蛋白）為免疫指標，采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）和熒光定量PCR的方法，進行基因的mRNA表達檢測，并以β-actin為內(nèi)參照進行基因表達水平的定量分析。結(jié)果顯示，三個試驗組中0.1％活菌制劑組的凡納濱對蝦