黃連須及其主要生物堿對非特異性免疫及鯉魚抗病力的影響.pdf

1、目的：黃連為清熱燥濕類中藥，因其具有抗菌和解熱等活性而被廣泛應(yīng)用在臨床獸醫(yī)學(xué)上，然而，關(guān)于其對巨噬細(xì)胞功能和鯉魚非特異性免疫活性的影響還未見報道。黃連須為附著在黃連根莖上的不定根，大部分被農(nóng)民當(dāng)作廢棄物丟棄在田間，本研究以黃連須及其生物堿為研究對象，對其調(diào)控非特異性免疫，增強鯉魚抗病力的作用機制做了初步探索，旨在促進(jìn)黃連的綜合開發(fā)利用。
　　方法和結(jié)果：
　?。?）采用HPLC法對黃連須中生物堿類成分進(jìn)行了含量測定，運用高速

2、逆流色譜技術(shù)對黃連須中主要生物堿進(jìn)行提取分離。
　　（2）通過測定黃連須提取液及其主要生物堿對嗜水氣單胞菌和副溶血弧菌的最小抑菌濃度探究它們的抑菌活性。結(jié)果顯示，黃連須、總堿、小檗堿和黃連堿在體外對嗜水氣單胞菌和副溶血弧菌均有一定的抗菌活性，而且，黃連總生物堿的抑菌作用要優(yōu)于小檗堿、黃連堿和黃連須。
　?。?）在細(xì)胞水平初步探究黃連生物堿對體外培養(yǎng)的小鼠巨噬細(xì)胞非特異性免疫功能的影響。結(jié)果顯示，4種黃連生物堿對小鼠腹腔巨噬細(xì)

3、胞的吞噬功能都有不同程度的提高，小檗堿效果最好；小檗堿、黃連堿和巴馬汀對小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的呼吸爆發(fā)活性具有正向調(diào)節(jié)作用。體外細(xì)胞實驗結(jié)果表明，黃連生物堿具有潛在的調(diào)節(jié)非特異性免疫的藥理活性。
　?。?）通過在鯉魚基礎(chǔ)飼料中添加一定比例的黃連須及其主要生物堿，探討黃連須及其主要生物堿對鯉魚血清非特異性免疫指標(biāo)（溶菌酶、髓過氧化物酶和補體C3）、頭腎巨噬細(xì)胞吞噬和呼吸爆發(fā)功能的影響。實驗分為7組，NC、FRC-L（12.5g/kg黃連

4、須）、FRC-M（25g/kg黃連須）、FRC-H（50g/kg黃連須）、TA（0.78g/kg總堿）、BBR（0.78g/kg小檗堿）和Cop（0.78g/kg黃連堿）組。結(jié)果顯示，在飼喂飼料第14天，與對照組相比，血清溶菌酶和補體C3活性的各實驗組與對照組相比均沒有顯著性的差異，髓過氧化物酶活性、呼吸爆發(fā)和吞噬活性只有FRC-M組顯示出了顯著性地提高。在飼喂飼料第21天，與對照組相比，F(xiàn)RC-M、FRC-H、TA、BBR和Cop對血

5、清溶菌酶活性、髓過氧化物酶活性以及巨噬細(xì)胞的呼吸爆發(fā)活性均有顯著性的提高。對于血清補體C3活性和巨噬細(xì)胞吞噬活性，與對照組相比，F(xiàn)RC-M組，TA組和BBR組達(dá)到了顯著性的差異。
　　（5）采用實時熒光定量PCR檢測了黃連須及其主要生物堿對鯉魚頭腎和脾臟免疫相關(guān)基因mRNA表達(dá)的影響。結(jié)果顯示，與對照組相比，F(xiàn)RC-M、FRC-H、TA和BBR能顯著上調(diào)鯉魚頭腎中IL-1β的表達(dá)；對于頭腎中TNF-α mRNA的表達(dá)，F(xiàn)RC-L、

6、FRC-M、FRC-H、TA、BBR和Cop對其有顯著性地上調(diào)作用；另外，F(xiàn)RC-M、FRC-H、TA、BBR和Cop能顯著上調(diào)鯉魚頭腎中l(wèi)ysozyme-c基因的表達(dá)；對于頭腎中C3 mRNA，F(xiàn)RC-M、TA和BBR對其表現(xiàn)了顯著性的上調(diào)作用；而且，F(xiàn)RC-L、FRC-M和FRC-H能夠顯著下調(diào)鯉魚頭腎中IL-10的表達(dá)。
　?。?）采用人工感染嗜水氣單胞菌攻毒試驗，研究了黃連須及其主要生物堿對鯉魚感染嗜水氣單胞菌存活率的影響