30333.帽兒山地區(qū)異色瓢蟲不同色斑型的srap與issr分析

1、學(xué)校代碼：10225學(xué)號：09020學(xué)位論文帽兒山地區(qū)異色瓢蟲不同色斑型的SRAP與ISSR分析指導(dǎo)教師姓名：申請學(xué)位級別：論文提交日期：授予學(xué)位單位：程琳遲德富教授碩士20094東北林業(yè)大學(xué)東北林業(yè)大學(xué)學(xué)科專業(yè)：森林生物工程論文答辯日期：20096授予學(xué)位日期：20096答辯委員會主席：論文評閱人：春多厶櫛素大學(xué)摘要摘要異色瓢蟲(HarmoniaaxyridisPallas)主要分布于亞洲大陸，是一種在廣泛的地理分布上具有高度多型性的

2、瓢蟲，學(xué)術(shù)界存在多種命名方法。本研究在完成材料DNA提取的基礎(chǔ)上，對60種不同色斑型異色瓢蟲材料進行了SRAP和ISSR分子標記，用篩選出的多態(tài)性較好的15對SRAP引物和15個ISSR引物組合對其進行PCR擴增和標記分析。結(jié)果表明：(1)總DNA的提取采用CTAB法，并加以改進。改進后從異色瓢蟲中所提取的總DNA得率和純度較高，能滿足PCR反應(yīng)的需要。(2)首次將SRAP技術(shù)及ISSR技術(shù)應(yīng)用于多種不同色斑型異色瓢蟲中，分別建立了最優(yōu)

3、SRAP—PCR和ISSRPCR的反應(yīng)體系及擴增程序。SRAP反應(yīng)體系，即在20“L的體系中：1xBuffer，M彭0625mmol／L，dNTPs015mmol／L，引物025gmol／L，DNA50～100ng，Taq酶15U；共40個循環(huán)；前5個循環(huán)為94℃變性1min，35℃復(fù)性1min，72℃延伸1mira后35個循環(huán)僅將復(fù)性溫度升為503℃；最后72℃延伸7min。ISSR反應(yīng)體系，即在20此的體系中：1xBuffer，M9

4、2125mmol／L，dNTPs02mmol／L，引物O15lamol／L，DNA100～150ng，Taq酶1U；共35個循環(huán)，94℃變性30S，533℃退火1min，72℃延伸1min，最后72℃延伸7min。(3)對60份供試材料提取的基因組DNA，篩選出多態(tài)性較好的15對SRAP引物共擴增出326條帶，多態(tài)性帶計214條，多態(tài)條帶比率為6564％，遺傳相似系數(shù)變幅范圍在04488～07008；篩選出多態(tài)性較好的15個ISSR引物

5、共擴增出215條帶，多態(tài)條帶計201條，多態(tài)條帶比率為9349％，遺傳相關(guān)系數(shù)變幅范圍在0449406966。(4)多態(tài)位點比率(P)、有效等位基因數(shù)(Ae)、Nei指數(shù)(H)和Shannon指數(shù)(，)所揭示的兩個底型組遺傳多樣性水平基本一致，均為黃底黑斑型遺傳多樣性高，與兩者數(shù)值統(tǒng)計相符。(5)從60份供試材料SRAP和ISSR以及兩者聚合所得的數(shù)據(jù)構(gòu)建的分子聚類樹狀圖可知，兩種標記都可較好的把材料區(qū)分開來，大多數(shù)相同數(shù)量斑點的種類和

6、同底色型都能夠聚在一起，如黃底斑型：十八斑變型42號和十八斑變型43號、十九斑變型48號和50號、十九斑變型45號和46號、十六斑變型36號和39號、四斑變型4號和6號、八斑變型14號和16號都聚為一組；黑底斑型：重名變種與鮮明變型、眼斑變型和雙月斑變型分別聚為一組，這些結(jié)果與形態(tài)分類一致。(6)研究表明SRAP和ISSR的聚類分析結(jié)果存在差異。對兩種方法進行的相關(guān)性分析表明，他們之間仍存在極顯著相關(guān)性。在對兩種標記復(fù)合聚類與單一聚類的