苦瓜素Ⅰ和Ⅱ?qū)喼抻衩酌獫{蛋白表達(dá)的影響.pdf

1、苦瓜素類化合物是從苦瓜莖葉中分離純化出的一類葫蘆烷型四環(huán)三萜類具殺蟲活性的化合物，包括苦瓜素Ⅰ、苦瓜素Ⅱ和苦瓜皂苷元L等。研究表明，這些化合物對多種農(nóng)業(yè)害蟲的取食、產(chǎn)卵和生長發(fā)育有抑制作用，但對亞洲玉米螟幼蟲血漿蛋白的影響尚未見報(bào)道。
　　為了探究苦瓜素類化合物對亞洲玉米螟生長發(fā)育影響的作用機(jī)理，以期為亞洲玉米螟的防治和新型殺蟲劑的研制提供科學(xué)的依據(jù)，本文通過測定苦瓜葉正丁醇萃取物和苦瓜素Ⅰ對亞洲玉米螟幼蟲體重增長的抑制作用及其對

2、能量物質(zhì)代謝的影響，確定了苦瓜素類化合物對害蟲的作用方式為抑制其生長發(fā)育。進(jìn)一步測定了苦瓜素Ⅰ和苦瓜素Ⅱ等苦瓜素類化合物對亞洲玉米螟幼蟲離體酚氧化酶活性的抑制作用及其對亞洲玉米螟幼蟲血漿蛋白表達(dá)的影響，研究結(jié)果如下：
　　1.苦瓜葉正丁醇萃取物對亞洲玉米螟幼蟲能量物質(zhì)代謝的影響
　　采用飼料混藥法，測定了苦瓜正丁醇萃取物對亞洲玉米螟幼蟲能量物質(zhì)的影響。苦瓜葉正丁醇萃取物對幼蟲體重增長抑制率隨著處理濃度的增加而升高。苦瓜葉正丁

3、醇萃取物在處理的3d內(nèi)，幼蟲血淋巴總蛋白的含量顯著降低，總糖含量明顯增加，但對幼蟲脂質(zhì)含量的影響不明顯。
　　2.苦瓜素Ⅰ對亞洲玉米螟幼蟲能量物質(zhì)代謝的影響
　　采用飼料混藥法，測定了苦瓜素Ⅰ對亞洲玉米螟幼蟲能量物質(zhì)的影響，結(jié)果表明苦瓜素Ⅰ對幼蟲體重的增加有顯著的抑制作用?？喙纤丌窨娠@著降低幼蟲血淋巴總蛋白含量，但對幼蟲血淋巴總糖含量的影響不顯著。
　　3.苦瓜素Ⅰ和苦瓜素Ⅱ?qū)喼抻衩酌紫x離體酚氧化酶活性的影響

4、>　　采用硫酸銨沉淀法對亞洲玉米螟酚氧化酶進(jìn)行純化，得到的初純化的離體酚氧化酶酶純化倍數(shù)為2.50，酶活力回收率為92.61％。采用酶標(biāo)儀微量法，以左旋多巴為底物，首先測定了丙酮、甲醇、乙醇、二甲基亞砜等幾種常用有機(jī)溶劑對離體酚氧化酶活性的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)當(dāng)二甲基亞砜含量小于7.5%時(shí)，亞洲玉米螟幼蟲離體酚氧化酶的相對活力在97%以上，對亞洲玉米螟幼蟲離體酚氧化酶活性的影響最小。隨后，將苦瓜素Ⅰ、苦瓜素Ⅱ分別溶于二甲基亞砜中，保持二甲基亞

5、砜的終濃度為5%，測定其對亞洲玉米螟幼蟲離體酚氧化酶活性的影響。結(jié)果表明，苦瓜素Ⅰ和苦瓜素Ⅱ均對亞洲玉米螟幼蟲離體酚氧化酶活性有明顯的抑制作用，抑制中濃度IC50分別為180.45μg/mL和1126.00μg/mL，苦瓜素Ⅰ的抑制作用明顯強(qiáng)于苦瓜素Ⅱ。4.苦瓜素Ⅰ和苦瓜素Ⅱ?qū)喼抻衩酌紫x血淋巴蛋白質(zhì)表達(dá)的影響
　　用含3mg/g的苦瓜素Ⅰ和苦瓜素Ⅱ的飼料飼喂亞洲玉米螟幼蟲2d后，采用雙向電泳2-DE技術(shù)和MALDI-TOF/T

6、OF質(zhì)譜分析法對幼蟲血漿蛋白進(jìn)行鑒定分析。結(jié)果表明，苦瓜素Ⅰ和苦瓜素Ⅱ均對亞洲玉米螟血漿蛋白表達(dá)有明顯的影響。經(jīng)苦瓜素Ⅰ和苦瓜素Ⅱ處理的亞洲玉米螟幼蟲血漿蛋白質(zhì)圖譜上的蛋白質(zhì)點(diǎn)均明顯少于對照組，苦瓜素Ⅰ處理的亞洲玉米螟幼蟲血漿蛋白點(diǎn)比對照減少了226個(gè)，苦瓜素Ⅱ處理的亞洲玉米螟幼蟲血漿蛋白質(zhì)點(diǎn)比對照減少331個(gè)。比較苦瓜素Ⅰ處理組和對照組的蛋白點(diǎn)表達(dá)差異，蛋白質(zhì)含量差異倍數(shù)大于1.2倍的蛋白點(diǎn)有5個(gè)斑點(diǎn)，均為表達(dá)增加；其中，表達(dá)上調(diào)蛋白