阻斷UPP對腦缺血大鼠NF-κB、p53的作用機制研究.pdf

1、背景與目的:泛素-蛋白酶體通路(UPP)是細胞內重要的非溶酶體蛋白降解途徑，參與炎癥反應等的調節(jié)。大量研究證明炎癥反應是腦缺血再灌注損傷的重要病理生理機制。NF-K B轉錄調節(jié)多種炎癥相關因子的表達而被認為是腦缺血后炎癥反應中最重要的調控因子之一?？梢娹D錄活性是決定NF-KB功能的關鍵因素。UPP通過降解泛素化IKB而使NF-KB激活。用蛋白酶體抑制劑阻斷UPP可抑制它的轉錄活性，從而調節(jié)NF-KB調控的炎癥反應。在腦缺血模型中用蛋白酶

2、體抑制劑阻斷UPP是否可通過抑制NF-KB的轉錄活性而產生神經保護作用這方面的研究國內未見相關報道。因此設想在腦缺血模型中可通過阻斷LIPP，抑制NF-KB的轉錄活性，從而減輕腦缺血再灌注后的炎癥反應。試圖從炎癥反應方面說明阻斷UPP產生神經保護作用的機理，為臨床治療腦缺血提供理論基礎和新方法。 方法:健康雄性SD大鼠132只隨機分為5個組：正常組、假手術組、生理鹽水對照組、缺血組和干預組。后2組根據再灌注時間又分為再灌注6h、

3、12h、24h、和7d亞組。線栓法制作大腦中動脈缺血2h再灌注模型。干預組在缺血再灌注后立即靜脈給予clasto-1actacystin β-1actone(O.03mg／kg)以阻斷UPP。前3組在術后24h處死動物，后2組在相應時間點處死動物。斷頭取腦，制作石蠟切片。HE染色觀察白細胞浸潤。免疫組織化學方法檢測NF-KB蛋白的表達。RT-PCR檢測NF-KBmRNA的表達。TTC染色測梗死體積。共聚焦激光掃描顯微鏡(CLSM)結合F

4、ITC標記NF-KB p65亞基和PI標記細胞核的熒光雙標技術對NF-KB進行定位和定量分析，顯示其轉錄活性。 結果: 1．腦缺血再灌注6h開始出現NF-K B蛋白及其mRNA的表達，NF-K B mRNA表達于12h達高峰而NF-KB蛋白表達于24h達高峰，之后逐漸減少，至7d時仍見有表達。正常組和假手術組未見NF-KB表達。生理鹽水對照組NF-KB表達增加，與缺血再灌注24h亞組比較p>0.05，無統(tǒng)計學差異。干預組

5、，給予clasto-lactacyst in斷Upp后,見各時間點Nf-Kb表達減少,與缺血組比統(tǒng)計學意義。 2.腦缺血再灌注6h開始出現白細胞浸潤,之后逐漸增多,24h達高峰,7d仍見炎性細胞浸潤。正常組和假手術組未見白細胞浸潤。生理鹽水對照組白細胞浸潤增加,與缺血再灌注24h亞組比較P>0.05,無統(tǒng)計學差異。干預組各時間點白細胞浸潤減輕,與缺血組比較P<0.05,有統(tǒng)計學意義。 3.腦缺血再灌注6h開始出現腦梗死,

6、于24h達高峰。正常組和假手術組未見腦梗死。生理鹽水對照組梗死體積增大,與缺血再灌注24h亞組比較p<0.05,無統(tǒng)計學差異。干預組各時間點梗死體積縮小,至24h和7d分別縮小了44[％]和36[％]。與缺血組比較,除再灌注6h亞組外,其余各亞組P<0.05,有統(tǒng)計學意義。 4.腦缺血再灌注24hclsm見細胞核中出現代表nf-Kb的綠色熒光,顯示Nf-Kb激活。干預組見細胞核中綠色熒光減少,細胞核區(qū)綠色熒光與細胞漿區(qū)綠色熒光的