bFGF對H-,2-O-,2-誘導的PC12細胞凋亡的影響以及ERK1-2通路在其中的作用.pdf

1、目的：探討堿性成纖維細胞生長因子(basicfibroblastgrowthfactor,bFGF)對過氧化氫(H2O2)誘導的PCI2細胞凋亡的影響及其發(fā)揮作用的可能分子機制。 方法：本研究采用不同濃度的H2O2處理PCI2細胞24h，建立細胞損傷模型。用不同濃度的bFGF預處理細胞2h后加入(125μM)H2O2共同作用24h以探討bFGF的保護作用。采用(125μM)H2O2作用PCI2細胞24h建立體外細胞凋亡模型，觀察

2、bFGF對(125μM)H2O2誘導的PCI2細胞凋亡的影響。CCK-8法檢測細胞存活率，Hoechst332558核染色進行細胞凋亡形態(tài)學分析，流式細胞儀檢測凋亡細胞數(shù)量，分光光度法檢測PC12細胞內(nèi)超氧化物歧化酶(SOD)、半胱天冬酶-3(Caspase-3)的活性，WesternBlotting方法檢測PC12細胞內(nèi)細胞外信號調(diào)節(jié)激酶1/2(ERK1/2)及磷酸化ERK1/2蛋白的含量以探討bFGF作用機制。 結(jié)果：

3、 1.H2O2可以顯著降低PC12細胞的存活率，在50～175μM濃度范圍內(nèi)呈現(xiàn)劑量相關(guān)性，隨著H2O2濃度增加，對PC12細胞的毒性也增加；bFGF預處理細胞2h可以顯著減輕H2O2對PC12細胞的損傷，在5～80ng/mL范圍內(nèi)，bFGF可以劑量依賴性拮抗H2O2對PC12細胞的損傷作用，隨著bFGF濃度增加，PC12細胞的存活率也增加； 2.(125μM)H2O2作用PC12細胞24h可以顯著降低細胞內(nèi)SOD的活性，(4

4、0ng/mL)bFGF預處理細胞2h可顯著拮抗(125μM)H2O2引起的SOD活性的降低，其細胞內(nèi)SOD活性較僅用(125μM)H2O2組升高37.49％； 3.(125μM)H2O2作用PC12細胞24h可誘導細胞凋亡，而(40ng/mL)bFGF預處理細胞2h對(125gM)H2O2誘導的PC12細胞凋亡有明顯的抑制作用；預先用(10μM)U0126(MEK1/2的特異性阻斷劑)作用細胞30min阻斷ERK1/2信號傳導途

5、徑后，bFGF拮抗PC12細胞凋亡的作用被部分抑制： 4.(125μM)H2O2作用PC12細胞4h可顯著增加PC12細胞內(nèi)Caspase-3的活性，并且這種活化作用可以被(40ng/mL)bFGF預處理細胞2h所抑制； 5.(125μM)H2O2刺激PC12細胞10min、(40ng/mL)bFGF刺激PC12細胞15min均能激活ERK1/2信號傳導途徑，使PC12細胞內(nèi)ERK1/2高水平磷酸化；(40ng/mL)b

6、FGF先刺激細胞15min后，再用(125μM)H2O2作用細胞10min后ERK1/2的磷酸化水甲較僅用(125μM)H2O2刺激組顯著提高；但預先用(10μM)U0126作用細胞30min后，再用(40ng/ml)bFGF和(125μM)H2O2先后處理細胞，ERK1/2的磷酸化水平顯著降低。 結(jié)論： 1.在50～175μM濃度范圍內(nèi)，H2O2可以劑量依賴性降低PC12細胞存活率，該作用與降低細胞內(nèi)SOD活性、激活C