硒通過(guò)microRNA155調(diào)控金黃色葡萄球菌性乳腺炎發(fā)生的作用機(jī)制研究.pdf

1、硒在被發(fā)現(xiàn)的前期被認(rèn)為是一種有毒物質(zhì)，但隨著研究的深入和科技的發(fā)展發(fā)現(xiàn)硒是多種生物體所必需的微量營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，對(duì)人體及多種動(dòng)物器官的發(fā)育及生理功能的作用不可替代，硒缺乏會(huì)降低谷胱甘肽過(guò)氧化物酶的活性，進(jìn)而使自身的抗氧化能力減弱，體內(nèi)累積大量的過(guò)氧化物和脂質(zhì)自由基會(huì)破壞細(xì)胞和損傷組織，同時(shí)降低組織的免疫能力。硒補(bǔ)充與全身炎癥反應(yīng)綜合征和敗血癥的治愈有關(guān)，體內(nèi)營(yíng)養(yǎng)硒攝入充分的個(gè)人，具有顯著的免疫刺激效應(yīng)，可以增強(qiáng)活化和促進(jìn)增殖T細(xì)胞，增加NK細(xì)

2、胞活性。乳腺炎是奶牛常發(fā)的乳腺組織炎癥性疾病，多發(fā)生于奶牛泌乳期。臨床上乳腺炎的主要致病菌是金黃色葡萄球菌，引發(fā)乳房紅腫，降低產(chǎn)奶量，嚴(yán)重感染時(shí)會(huì)導(dǎo)致奶牛全身性炎癥損傷。MicroRNA-155(miR-155)是一種典型的多生物學(xué)功能性miRNA分子，miR-155能影響造血細(xì)胞的分化，并在炎癥反應(yīng)、免疫反應(yīng)中發(fā)揮重要作用。炎癥刺激后miR-155在生物體內(nèi)表達(dá)上調(diào)，還可被TLRs通過(guò)MyD88依賴性通路誘導(dǎo)，后經(jīng)NF-κB和JNK/

3、MAPK途徑調(diào)控炎癥反應(yīng)。但目前關(guān)于硒通過(guò)miR-155調(diào)控金葡菌誘導(dǎo)的細(xì)胞因子及TLR2表達(dá)進(jìn)而抑制NF-κB和MAPK的活化而減輕炎癥反應(yīng)的發(fā)生機(jī)制還尚不了解。
　　本試驗(yàn)體內(nèi)實(shí)驗(yàn)部分通過(guò)飼喂SPF級(jí)BALB/c小鼠缺硒鼠糧、正常硒鼠糧、高硒鼠糧60天，待雌鼠分娩5～7d后經(jīng)乳導(dǎo)管灌注金葡菌重懸液建立小鼠乳腺炎癥模型，研究硒對(duì)金葡菌性乳腺炎癥反應(yīng)的影響。經(jīng)乳腺組織硒含量檢測(cè)、乳腺病理組織學(xué)觀察、MPO活性檢測(cè)、miR-155及

4、細(xì)胞因子和TLR1，2，6的表達(dá)分析，研究不同日糧硒水平對(duì)金葡菌誘導(dǎo)的小鼠乳腺炎癥反應(yīng)的影響。結(jié)果顯示，攝入不同日糧硒會(huì)影響乳腺組織硒含量，病理組織學(xué)分析表明金葡菌感染后缺硒小鼠乳腺有大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，腺泡結(jié)構(gòu)被破壞，而高硒小鼠乳腺結(jié)構(gòu)較完整。并且qPCR和ELISA檢測(cè)結(jié)果表明缺硒小鼠乳腺組織中miR-155和促炎因子表達(dá)水平顯著高于正常硒含量小鼠。這些結(jié)果說(shuō)明缺硒日糧促進(jìn)金葡菌誘導(dǎo)的小鼠乳腺炎癥反應(yīng)，而補(bǔ)硒可以顯著抑制TLR2表達(dá)，

5、同時(shí)抑制其下游NF-κB和MAPK炎癥信號(hào)通路中蛋白磷酸化來(lái)降低促炎因子的產(chǎn)生，促進(jìn)乳腺組織的炎性修復(fù)功能。
　　然后為了進(jìn)一步確證體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，我們分離培養(yǎng)了原代小鼠乳腺上皮細(xì)胞(MMECs)并進(jìn)行體外實(shí)驗(yàn)。MMECs經(jīng)CK-18鑒定合格及MTT活性檢測(cè)后進(jìn)行miR-155-5p mimics轉(zhuǎn)染，然后用含不同硒濃度的Opti-MEM培養(yǎng)12h再添加金葡菌懸液構(gòu)建細(xì)胞模型，同時(shí)設(shè)立未轉(zhuǎn)染miR-155 mimics對(duì)照組。qPC