柑橘類黃酮諾必擂停對(duì)荷瘤小鼠免疫功能的影響及其抗腫瘤作用研究.pdf

1、世界范圍內(nèi)肝癌發(fā)病率正呈逐年上升趨勢(shì)，是威脅人類健康的第八大疾病，每年新發(fā)肝癌中42％出現(xiàn)在我國(guó)大陸，已占我國(guó)腫瘤死因的第二位。腫瘤的形成是一個(gè)正常細(xì)胞生長(zhǎng)過(guò)程改變和基因改變的多因素、多階段過(guò)程，機(jī)體免疫功能的異常，是腫瘤發(fā)生、發(fā)展的重要原因。研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤患者都有不同程度的免疫功能低下?tīng)顟B(tài)，如脾臟異常變大，胸腺嚴(yán)重萎縮，T、B細(xì)胞增殖力下降，IL-2含量下降等，這也是導(dǎo)致腫瘤無(wú)限制增長(zhǎng)和免疫逃避的一個(gè)重要因素。因此，正確評(píng)價(jià)荷瘤機(jī)體的

2、免疫功能是研究抗腫瘤藥物作用機(jī)制的重要方面。 近年，尋找高效低毒的天然抗癌藥物與生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑成為世界新藥研發(fā)領(lǐng)域的熱點(diǎn)。柑橘類果實(shí)是我國(guó)傳統(tǒng)的中藥材，一般以橘皮入藥。諾必擂停(nobiletin)即是從蕓香科植物橘及其栽培變種的果實(shí)中提取的一種類黃酮，化學(xué)結(jié)構(gòu)：5,6,7,8,3′4′-六甲氧基黃酮(5,6,7,8,3′4′-hexamethoxyflavone)。國(guó)外眾多研究證明諾必擂停對(duì)胃癌、肺癌、白血病等多種腫瘤細(xì)胞作用

3、明顯，但未見(jiàn)肝癌研究報(bào)道。國(guó)內(nèi)其實(shí)驗(yàn)研究甚少，未見(jiàn)免疫方面研究報(bào)道。鑒于免疫機(jī)制在抗腫瘤方面的重要作用，本實(shí)驗(yàn)以Heps肝癌移植性實(shí)體瘤為模型，觀察了NOB對(duì)肝癌生長(zhǎng)、細(xì)胞凋亡，及對(duì)荷瘤小鼠免疫功能的影響，旨在為諾必擂停的藥理學(xué)研究及臨床應(yīng)用提供一定理論依據(jù)。 衡量抗腫瘤療效的最直接的指標(biāo)是瘤重、抑瘤率。構(gòu)建小鼠肝癌Heps實(shí)體瘤模型，末次給藥后24h，處死小鼠，解剖剝離腫瘤稱重，計(jì)算抑瘤率。諾必擂停三個(gè)劑量對(duì)腫瘤細(xì)胞均有顯著的

4、抑制生長(zhǎng)作用，并呈一定的劑量-效應(yīng)關(guān)系。與模型組比較差異顯著(P＜0.01)，三次重復(fù)實(shí)驗(yàn)抑瘤率均在30％以上，顯示了穩(wěn)定的抗腫瘤活性。誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡是目前抗腫瘤藥物的新靶點(diǎn)。我們觀察了諾必擂停對(duì)腫瘤細(xì)胞形態(tài)學(xué)的影響，發(fā)現(xiàn)用藥組腫瘤細(xì)胞凋亡明顯，電鏡下可見(jiàn)典型細(xì)胞凋亡形態(tài)變化，AO/EB雙熒光染色法可區(qū)分凋亡與壞死細(xì)胞，進(jìn)一步證實(shí)了這點(diǎn)，提示諾必擂停可誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的凋亡，與國(guó)外報(bào)道結(jié)果一致。 抗腫瘤免疫以細(xì)胞免疫為主，細(xì)胞因子

5、與CTL、NKC起協(xié)同抗腫瘤作用。我們?nèi)∑⑴K、胸腺及體重計(jì)算脾指數(shù)、胸腺指數(shù)；以遲發(fā)性超敏反應(yīng)觀察動(dòng)物整體細(xì)胞免疫機(jī)能；MTT法檢測(cè)ConA刺激T淋巴細(xì)胞增殖，LPS刺激B淋巴細(xì)胞增殖；乳酸脫氫酶(LDH)釋放法檢測(cè)CTL、NKC殺傷活性；雙抗體夾心ABC-ELISA法檢測(cè)脾細(xì)胞誘生IL-2及腹腔巨噬細(xì)胞誘生TNF-α量；分光光度法測(cè)定血清溶血素。結(jié)果表明，諾必擂停各劑量組均可降低小鼠因荷瘤所致脾指數(shù)異常升高，使降低的胸腺指數(shù)明顯升高，

6、證明諾必擂停對(duì)荷瘤小鼠有免疫保護(hù)作用；提高荷瘤小鼠降低的遲發(fā)性超敏反應(yīng)；明顯增強(qiáng)了脾T、B淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)；使脾細(xì)胞分泌IL-2及腹腔巨噬細(xì)胞分泌TNF-α量顯著提高；CTL、NK細(xì)胞殺傷活性顯著增強(qiáng)；血清溶血素水平提高。 綜上所述，NOB對(duì)小鼠移植性實(shí)體瘤Heps肝癌有良好的抑制作用，其作用機(jī)制有：直接作用于腫瘤細(xì)胞，誘導(dǎo)凋亡；提高荷瘤小鼠特異性和非特異性細(xì)胞免疫功能及體液免疫功能；提高免疫細(xì)胞殺傷活性；促進(jìn)抗腫瘤細(xì)胞因子分泌