海島棉抗黃萎病基因分子標記研究.pdf

1、本研究利用海島棉與陸地棉種間配制的雜交組合，對海島棉黃萎病抗性鑒定、分子標記和與抗性相關的分子標記的克隆等內(nèi)容進行了深入的研究。其目的在于：找到與黃萎病抗性基因連鎖的分子標記并克隆該標記，為最終克隆棉花黃萎病抗性基因及分子標記輔助育種奠定基礎。本研究主要結(jié)果如下： 1.陸地棉感病品種中棉所8號×海島棉抗病品種Pima90-53組合的F2及F2：3家系的中等致病力的黃萎病菌系抗性鑒定結(jié)果表明，F(xiàn)2群體中的單株及通過F2：3家系鑒定

2、所對應的F2單株中，抗病單株：感病單株的比例符合3：1的卡方適合性測驗。 2.用768對SSR引物對中棉所8號×Pima90-53組合含有182個單株的F2群體的抗、感基因池進行擴增，在這些引物中BNL3255和BNL2440引物在該組合的抗、感基因池之間表現(xiàn)多態(tài)性，且這兩對引物在該組合親本的相應位置上也存在多態(tài)性。其中，BNL3255在抗、感基因池間擴增出一條大小為208bp的多態(tài)性片斷，定名為BNL3255-208。利用這兩

3、對引物對該組合F2單株進行SSR擴增，并利用MAPMAKER/EXP(VERSION3.0b)軟件對擴增結(jié)果進行分析，結(jié)果表明，BNL3255-208標記與黃萎病抗性基因連鎖，且它們之間的遺傳距離為13.7cM，BNL2440擴增出的多態(tài)性標記與黃萎病抗性基因之間不連鎖。用356對AFLP引物對該組合的F2抗、感基因池進行擴增，結(jié)果表明在該組合的抗、感基因池之間未能找到差異引物。 4.用中棉所8號×Pima90-53組合含有21

4、5個單株及含有100個單株的兩個F2群體進行BNL3255-208標記的應用性驗證，結(jié)果表明分別有71.75﹪和88.61﹪的抗病單株上存在該標記，該標記可以作為分子標記輔助選擇的一種驗證手段在育種實踐中加以應用。 5.通過基因工程的手段將與抗病相關的差異帶BNL3255-208回收，并進行連接、轉(zhuǎn)化、克隆、測序，結(jié)果表明該差異帶是一條長211bp的、含10次TG重復的片段。通過測序，該片段可以為細菌人工染色體(BAC)文庫的篩