恐傷孕鼠對其仔鼠腦發(fā)育的影響及其機(jī)制研究.pdf

1、目的本實驗采用“恐傷孕鼠”的方法復(fù)制腎精虧虛的模型，研究孕鼠腎虛對其仔鼠腦發(fā)育的影響機(jī)制。 方法①本實驗采用3月齡SD(Sprague-Dawley)大鼠雌性30只，雄性15只，將其按2∶1的比例合籠配對。受孕后的雌鼠用隨機(jī)取數(shù)法分為正常組、模型組和補(bǔ)腎組，每組各10只。自懷孕第一天起，模型組和補(bǔ)腎組每日上、下午用貓恐嚇孕鼠各2小時直至其分娩，在仔鼠出生當(dāng)天和生后14天進(jìn)行指標(biāo)檢測。②記錄孕鼠產(chǎn)子數(shù)，評估其生育力。記錄仔鼠開眼、

2、出牙、張耳、被毛生長的時間；用電子天平稱取仔鼠出生當(dāng)天的體重及全腦濕重和生后14天的體重，從而判斷仔鼠的生長發(fā)育狀況。③光學(xué)顯微鏡和電子顯微鏡觀察各組仔鼠出生當(dāng)天和生后14天時大腦海馬區(qū)的形態(tài)學(xué)改變。④化學(xué)發(fā)光法檢測各組仔鼠生后14天時血清游離三碘甲腺原氨酸(FT3)、游離四碘甲腺原氨酸(FT4)及促甲狀腺激素(TSH)的含量。⑤用瓊脂糖凝膠電泳法檢測各組仔鼠生后14天時海馬區(qū)腦組織DNA降解片斷，同時用免疫組化法觀察細(xì)胞凋亡的相關(guān)指標(biāo)

3、Bcl-2/bax在海馬區(qū)腦組織的表達(dá)。⑥用酶標(biāo)儀檢測各組仔鼠生后14天時海馬區(qū)腦組織內(nèi)乙酰膽堿轉(zhuǎn)移酶(CHAT)和乙酰膽堿酯酶(Ache)的活力。⑦用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)法檢測腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)在各組仔鼠生后14天時海馬區(qū)腦組織的表達(dá)。 結(jié)果①孕鼠產(chǎn)子數(shù)、仔鼠的生長發(fā)育狀況：模型組孕鼠的每胎生產(chǎn)數(shù)低于正常組和補(bǔ)腎組(P＜0.01)。模型組仔鼠的生長發(fā)育落后于正常組和補(bǔ)腎組。補(bǔ)腎組與正常組相比無差異

4、。②仔鼠大腦組織包括海馬區(qū)的形態(tài)學(xué)改變：模型組仔鼠大腦組織包括海馬區(qū)光鏡下見神經(jīng)細(xì)胞數(shù)量減少，細(xì)胞間質(zhì)水腫，神經(jīng)元樹突分支減少。電鏡下大多數(shù)神經(jīng)細(xì)胞的細(xì)胞器結(jié)構(gòu)有異常，部分細(xì)胞核固縮。正常組與補(bǔ)腎組仔鼠形態(tài)學(xué)相比無明顯改變。③仔鼠生后14天時血清FT3、FT4、TSH的含量：模型組仔鼠血清FT4的含量低于正常組(P＜0.05)，血清FT3、TSH的含量與正常組相比無差異。補(bǔ)腎組仔鼠血清FT3、FT4、TSH的含量與正常組相比無統(tǒng)計學(xué)差異

5、。④仔鼠生后14天時海馬區(qū)腦組織的細(xì)胞凋亡及Bcl-2/bax在海馬區(qū)腦組織的表達(dá)：模型組仔鼠海馬區(qū)腦組織可見DNA降解片斷，正常組和補(bǔ)腎組則未見。模型組仔鼠較正常組和補(bǔ)腎組比較，其Bcl-2表達(dá)下調(diào)，bax表達(dá)上調(diào)。⑤仔鼠生后14天時海馬區(qū)腦組織內(nèi)CHAT和Ache的活力：模型組仔鼠AchE、CHAT的活力較正常組和補(bǔ)腎組樣本高(P＜0.01)。正常組和補(bǔ)腎組相比無統(tǒng)計學(xué)差異。⑥仔鼠生后14天時BDNF在海馬區(qū)腦組織的表達(dá)：模型組仔鼠

6、BDNFmRNA的半定量表達(dá)較正常組和補(bǔ)腎組下降，正常組和補(bǔ)腎組相比無差異。 結(jié)論本課題首次提出了“腎主腦發(fā)育”的觀點，并從腎對腦的結(jié)構(gòu)和功能影響的角度進(jìn)行了深入的理論探討。本實驗采用“恐傷孕鼠”的方法成功復(fù)制出腎精虧虛模型，發(fā)現(xiàn)模型組仔鼠具有先天腎虛的表現(xiàn)，其腦發(fā)育存在明顯的障礙，中藥補(bǔ)腎填精方可有效阻斷腎虛對腦發(fā)育的影響。模型組仔鼠血清TH含量顯著下降，伴隨著BDNF和Bcl-2表達(dá)下調(diào)，bax表達(dá)上調(diào)，CHAT和Ache活