小口徑新型人造血管的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的 觀察小口徑生物型人造血管移植后1.5年內(nèi)不同時(shí)期實(shí)驗(yàn)犬的生存、生活狀況，移植材料的組織相容性、移植血管腔內(nèi)壁內(nèi)膜層的組織病理學(xué)和掃描電鏡變化以及不同時(shí)期人造血管的通暢率，探討研制開發(fā)一種新型小口徑生物型人造血管。 方法 通過(guò)建立犬頸總動(dòng)脈-人造血管端端連續(xù)縫合的動(dòng)物模型，應(yīng)用床邊彩色B超和DSA造影技術(shù)監(jiān)測(cè)1.5年內(nèi)不同時(shí)期移植段人造血管的通暢情況，并在DSA造影術(shù)后分期切取標(biāo)本，做病理組織學(xué)和掃描電鏡檢查

2、，觀察移植血管腔內(nèi)壁內(nèi)膜層的內(nèi)皮細(xì)胞爬生、內(nèi)膜增生情況以及宿主組織在移植段血管管壁(血管支架)內(nèi)的再生情況，結(jié)合實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的生活、生存狀況，從而評(píng)定研制開發(fā)的新型小口徑生物型人造血管的價(jià)值。 研究?jī)?nèi)容和過(guò)程人造血管由廣東冠昊生物科技有限公司提供。是使用豬管材經(jīng)環(huán)氧化法固定，多方位去抗原，偶聯(lián)可粘附、富集生長(zhǎng)因子的特定多肽，并使內(nèi)腔表面帶負(fù)電荷的表面處理而制成的一種生物型人造血管，其去抗原方法不是靠脫細(xì)胞，而是用封閉或改變抗原決定簇

3、的方法。28只健康雜種犬作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，手術(shù)切除3cm頸總動(dòng)脈，以口徑4mm的小口徑新型人造血管進(jìn)行端端橋接。28只犬的28側(cè)頸部隨機(jī)分為1周、8周、12周、6月、12月、1.5年共六組，各含4、4、6、5、5、4條動(dòng)脈。六組的近、遠(yuǎn)心端均行端一端連續(xù)吻合術(shù)，按分組時(shí)間定期用彩色B超監(jiān)測(cè)每條移植血管的通暢情況，并于取材前行頸總動(dòng)脈DSA造影術(shù)，觀察人造血管不同時(shí)間的通暢率。所有實(shí)驗(yàn)犬在術(shù)中、術(shù)后均未使用抗凝藥物。所有28例于術(shù)后1～2周時(shí)

4、均行床邊彩色B超探測(cè)檢查，移植血管段均保持通暢。分別于術(shù)前隨機(jī)選擇性造影3例和術(shù)后3周、8周、12周、6月、12月、1.5年等六個(gè)時(shí)間段行經(jīng)股動(dòng)脈穿刺插管/或經(jīng)頸總動(dòng)脈直接穿刺插管(僅3例)頸總動(dòng)脈DSA造影術(shù)。在DSA檢查前均常規(guī)用床邊彩色B超作篩選檢查，第一批實(shí)驗(yàn)犬全部經(jīng)DSA檢查證實(shí)；第二批實(shí)驗(yàn)犬術(shù)后6月前均僅作床邊B超檢查，如發(fā)現(xiàn)不通或有不同程度狹窄者加做DSA檢查證實(shí)1例，1年以上剩余實(shí)驗(yàn)犬均行股動(dòng)脈穿刺插管頸總動(dòng)脈DSA造影

5、術(shù)。標(biāo)本經(jīng)處理后縱形剖開為兩部分，分別作病理組織學(xué)(HE、V-G染色)和掃描電鏡檢查，如移植血管阻塞，僅做病理組織學(xué)檢查。結(jié)果 28只犬術(shù)中及術(shù)后無(wú)死亡，無(wú)偏癱、失聲等神經(jīng)系統(tǒng)并發(fā)癥。12周組和6月組各1只犬分別于術(shù)后11天和術(shù)后5天傷口形成局部包塊，局部穿刺證實(shí)感染，予以加強(qiáng)抗生素治療及局部抽液處理后均于3周內(nèi)痊愈；未見移植血管暴露、破裂，所有傷口均愈合良好。 六組28條人造血管除了12周組、6月組、12月組、1.5年組各1、

6、1、2、2條血管阻塞外，其余血管均通暢，但12月組和1.5年組通暢的血管均可見不同程度的顯影延遲和充盈缺損。各個(gè)時(shí)期移植血管通暢率為：≤3月通暢率是96％；>3月≤1年通暢率是80％；>1年≤1.5年通暢率是50％。 手術(shù)切取標(biāo)本時(shí)發(fā)現(xiàn)，移植血管變硬，與周圍組織粘連緊密(1周組除外，移植血管外組織粘連較疏松)；而1年、1.5年組取材時(shí)反而發(fā)現(xiàn)移植血管與周圍組織粘連少、疏松，并可見移植血管遠(yuǎn)端有側(cè)枝血管形成?？v形剖開移植血管時(shí)發(fā)現(xiàn)

7、，1周時(shí)標(biāo)本腔內(nèi)壁即有較完整的厚薄不一的纖維膜狀物生長(zhǎng)，未見血管栓塞。8周和12周標(biāo)本腔內(nèi)壁膜狀物更致密，更均勻，未見有血栓及增生狹窄。6月、12月、1.5年組標(biāo)本共有5條(5/14)血管阻塞，阻塞的血管均未見明顯血栓形成。 病理組織學(xué)檢查：人造血管移植后1周：人造血管外肉眼可見有一層纖維組織鞘包裹，與人造血管間可見血凝塊；血管通暢，人造血管腔內(nèi)壁主要由含有大量紅細(xì)胞的一薄層纖維膜覆蓋。鏡下見血管吻合口處有少量的纖維組織增生混雜

8、有薄層少量紅色血栓形成，尚未見內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)。移植后8周，肉眼可見人造血管外己被機(jī)化的結(jié)締組織層包裹。鏡下見宿主組織通過(guò)人造血管孔隙長(zhǎng)入血管腔內(nèi)參與移植血管新內(nèi)膜的形成，新內(nèi)膜形成較均勻，其中有豐富的膠原纖維組織增生，但仍未見內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)。移植后12周，鏡下于吻合口處，可見新內(nèi)膜表面有不連續(xù)的內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)，且內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài)成熟，其下的膠原纖維增生更致密；而于人造血管中段，可見不成熟的內(nèi)皮細(xì)胞呈島狀生長(zhǎng)，新內(nèi)膜層結(jié)構(gòu)較吻合口處疏松，其間尚可見

9、炎性細(xì)胞生長(zhǎng)。因此，內(nèi)皮細(xì)胞可見自吻合口開始，其成熟度逐漸向移植血管中段遞減，而且細(xì)胞形態(tài)越靠近吻合口越象正常內(nèi)皮細(xì)胞。移植后6月，通暢的人造血管整段管腔內(nèi)面均可見內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)，吻合口附近新內(nèi)膜表面可見連續(xù)的內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)(圖24)。阻塞的1例鏡下人造血管內(nèi)膜于血管近端吻合口處可見纖維組織過(guò)度增生，但未見血栓。移植后12月，鏡下人造血管吻合口附近腔內(nèi)可見不同程度狹窄和纖維素樣物質(zhì)生長(zhǎng)，管腔仍可見通暢(圖25、26)。另外，移植血管管壁VG

10、染色尚可見支架層內(nèi)有大量膠原纖維和毛細(xì)血管生長(zhǎng)，原先的支架結(jié)構(gòu)已部分被宿主血管壁組織取代。移植后1.5年，鏡下人造血管管腔仍通暢，部分內(nèi)膜組織呈慢性炎癥表現(xiàn)。另外，移植血管管壁VG染色尚可見支架層內(nèi)有大量膠原纖維和毛細(xì)血管生長(zhǎng)，原先的支架結(jié)構(gòu)已大部分被宿主血管壁組織取代。掃描電鏡檢查顯示：人造血管移植后1周：吻合段血管表面幾乎被厚薄不一的膜狀物覆蓋，但吻合口仍清晰可見；人造血管近吻合口處可見均勻致密的片狀纖維膜覆蓋，并向吻合口處呈指樣生

11、長(zhǎng)，未見新生內(nèi)皮細(xì)胞的形態(tài)。移植后8周：吻合段血管表面完全被豐富密集的、大小不一的梭形或橢圓形細(xì)胞樣覆蓋，呈“鋪路石樣”改變，腔內(nèi)面吻合口已消失。人造血管吻合口處內(nèi)膜面可見小片狀梭形細(xì)胞覆蓋，細(xì)胞的形態(tài)與正常血管內(nèi)皮細(xì)胞略有差異。移植后12周：吻合口附近內(nèi)膜面更加光滑、平整，有似內(nèi)皮細(xì)胞的梭形細(xì)胞規(guī)則排列，較稀疏，不連續(xù)生長(zhǎng)?？梢娸^典型的類似內(nèi)皮細(xì)胞的梭形細(xì)胞由兩側(cè)吻合口開始向移植血管中段爬行，并己覆蓋過(guò)吻合口。移植后6月：自吻合口開始

12、即可見較致密類似內(nèi)皮細(xì)胞的梭形細(xì)胞生長(zhǎng)，并向移植血管中段連續(xù)爬行長(zhǎng)約1.1cm；另于移植血管中段可見多處片狀生長(zhǎng)的內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài)，遍及整段移植血管。 結(jié)論 以新型小口徑生物型人造血管修復(fù)3cm長(zhǎng)的犬頸總動(dòng)脈缺損是可行的，新內(nèi)膜形成早且完整，在12周時(shí)可見內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)，6月內(nèi)自然內(nèi)皮化相對(duì)滿意，雖然12月組以上的人造血管管腔內(nèi)可見不同程度的內(nèi)膜增生和沒(méi)有細(xì)胞結(jié)構(gòu)的異物生長(zhǎng)，但其具有的良好抗感染、抗血栓、生物相容和穩(wěn)定性、血管