原位雜交技術(shù)在大白菜和結(jié)球甘藍(lán)上的應(yīng)用研究.pdf

1、本研究以二倍體大白菜(AA，2n=2x=20)、二倍體結(jié)球甘藍(lán)(CC，2n=2x=18)及其三個(gè)初級(jí)三體、四倍體結(jié)球甘藍(lán)(CCCC，2n=4x=36)和二倍體大白菜種間雜交獲得的異源三倍體雜種(ACC，2n=3x=28)為材料，利用間期核和中期染色體熒光原位雜交(FISH)技術(shù)，分析重復(fù)序列25S rDNA在大白菜和結(jié)球甘藍(lán)的分布特點(diǎn)，準(zhǔn)確識(shí)別了A、C基因組的染色體。并分別以大白菜基因組總DNA和結(jié)球甘藍(lán)基因組總DNA為探針，對(duì)二倍體大

2、白菜、二倍體結(jié)球甘藍(lán)和異源三倍體進(jìn)行基因組原位雜交(GISH)，分析雜交信號(hào)特點(diǎn)，探討A基因組和C基因組的親緣關(guān)系。研究結(jié)果如下： 1．25S rDNA在大白菜基因組中存在著10個(gè)25S rDNA雜交信號(hào)，它們分別位于1號(hào)長臂近中部， 2號(hào)、3號(hào)和4號(hào)長臂靠近著絲點(diǎn)的位置，10號(hào)染色體的隨體上，雜交信號(hào)在不同染色體上的熒光強(qiáng)度強(qiáng)弱不同。 2．25S rDNA在結(jié)球甘藍(lán)染色體上檢出了4個(gè)雜交信號(hào)，它們分別位于3號(hào)染色體短臂

3、末端和9號(hào)染色體的隨體上；在Triplo4、Triplo5和Triplo6三個(gè)甘藍(lán)初級(jí)三體上也都檢出了4個(gè)信號(hào)，信號(hào)所屬的染色體和在染色體上分布的位置與二倍體相同。 3．25S rDNA在異源三倍體間期核上檢出了9個(gè)雜交信號(hào)，中期染色體上檢出了8個(gè)雜交信號(hào)。根據(jù)信號(hào)的位置可知，它們分別位于結(jié)球甘藍(lán)的3號(hào)染色體短臂的末端和9號(hào)染色體的隨體上，以及大白菜的2號(hào)、3號(hào)和4號(hào)染色體的長臂靠近著絲點(diǎn)的位置和10號(hào)染色體的隨體上，不同染色體

4、上的雜交信號(hào)強(qiáng)弱不同。 4．分別以大白菜的基因組總DNA和結(jié)球甘藍(lán)的基因組總DNA為探針與大白菜和結(jié)球甘藍(lán)雜交，所有染色體上均有雜交信號(hào)，但是A、C基因組染色體間的雜交信號(hào)特征不同。 5．大白菜的基因組總DNA為探針在異源三倍體雜種染色體上雜交。無封阻時(shí)，28條染色體上都有清晰而強(qiáng)烈的雜交信號(hào)，但A、C基因組染色體間的雜交信號(hào)的特征不同；封阻適當(dāng)時(shí)，有18條染色體上的信號(hào)十分微弱，其余10條染色體上的信號(hào)明顯可見，能在一