枯草桿菌噬菌體TXp1的生物學(xué)特性及抗性菌株的選育.pdf

1、肌苷是一種重要的核苷類化合物，目前工業(yè)上采用微生物發(fā)酵法進(jìn)行生產(chǎn)，使用的生產(chǎn)菌種為枯草芽孢桿菌。肌苷發(fā)酵過程枯草芽孢桿菌受到噬菌體感染后，因細(xì)胞裂解而導(dǎo)致發(fā)酵失敗，給發(fā)酵生產(chǎn)帶來極大的經(jīng)濟(jì)損失。選育抗噬菌體菌株從根本上改變了菌株的遺傳特性，使宿主菌中被噬菌體的所吸附的位點(diǎn)發(fā)生改變，是防止噬菌體感染的重要手段。本論文作者從肌苷發(fā)酵受噬菌體污染的發(fā)酵液中分離出噬菌體，研究噬菌體的生物學(xué)特性，利用自然選育和紫外誘變的方法獲得抗噬菌體菌株，為肌

2、苷發(fā)酵生產(chǎn)防止噬菌體污染提供可用于菌種輪換的生產(chǎn)菌株。
　　(1)通過雙層平板法從受污染的發(fā)酵液中分離得一株枯草桿菌噬菌體TXp1，該噬菌體為烈性噬菌體。噬菌體TXp1為蝌蚪狀，頭部為正多面體結(jié)構(gòu)，直徑大小64±2nm，有一明顯短尾，長約25±1nm。核酸電泳分析表明噬菌體核酸為雙鏈DNA噬菌體，基因組大小約為20kb。根據(jù)國際病毒分類委員會(huì)病毒分類第8次報(bào)告，該噬菌體分屬于有尾噬菌體目，短尾噬菌體科、ψ29噬菌體屬。
　　

3、(2)研究了噬菌體TXp1的生物學(xué)特性:噬菌體TXp1對(duì)枯草芽孢桿菌具有較強(qiáng)的宿主專一性，對(duì)芽孢桿菌屬其他種如短小芽孢桿菌、蠟狀芽孢桿菌不敏感。噬菌體TXp1在高溫條件下很容易失活，80℃條件下短時(shí)間內(nèi)40min內(nèi)迅速失活;強(qiáng)酸、強(qiáng)堿噬菌體對(duì)噬菌體TXp1對(duì)具有較強(qiáng)來活作用，而在pH6.0～7.0之間時(shí)比較穩(wěn)定;紫外線照射對(duì)噬菌體TXp1具有強(qiáng)殺來作用。噬菌體感染宿產(chǎn)的最佳感染復(fù)數(shù)(MOI)為0.1～1.0;增殖的潛伏期為40min，8

4、0min進(jìn)入裂解期，裂解量為99±3個(gè)噬菌體;在4℃或-80℃條件下保存存活率較高。
　　(3)通過自然選育和紫外誘變育種選育的方法篩選抗噬菌體菌株。篩選得到的抗性菌株通過溶源性檢查、遺傳穩(wěn)定性檢驗(yàn)和遺傳標(biāo)記分析，淘汰掉溶源性菌株、抗性不穩(wěn)定菌株和遺傳標(biāo)記不正確的菌株，最后得到24株抗菌株。進(jìn)一步通過肌苷發(fā)酵試驗(yàn)，選育出三株產(chǎn)苷能力較強(qiáng)的抗噬菌體菌株BacillussubtilisT105ZX-71、B.subtilisT105U