復方發(fā)酵中草藥對鯉鯽草魚生長非特異性免疫和抗病能力的影響.pdf

1、目的：水產(chǎn)品生產(chǎn)過程中抗生素的大量使用，導致抗生素等藥物殘留問題的日益突出，本文旨在研究抗生素的替代產(chǎn)品多菌種混合復方發(fā)酵中草藥的最佳工藝條件和其對三種常見淡水魚生長、免疫性能和抗病能力的影響，為綠色水產(chǎn)飼料添加劑和魚病防治藥物的開發(fā)奠定基礎。
　　方法：1采用米曲霉（Aspergillus oryzae）、枯草芽孢桿菌（Bacillus subitilis）、植物乳酸菌（Lactobacillus plantarum）、產(chǎn)朊假絲

2、酵母（Candida utilis）為復合發(fā)酵菌種，麩皮、豆粕、中藥（復方1：黃芪18份，黨參12份，當歸10份，白術(shù)8份，茯苓4份，柴胡3份，陳皮3份，山楂4份，麥芽6份，艾葉4份，黃芩6份，板藍根4份，大黃4份，甘草6份，生姜3份）2：1：7的比例組成發(fā)酵基質(zhì)，以纖維素酶活力為指標，先進行單因素實驗，然后，通過正交試驗的方法，選擇最優(yōu)發(fā)酵條件組合。
　　2將最優(yōu)發(fā)酵條件下制得的復方發(fā)酵中草藥應用到鯽魚飼料中，采用隨機分組的方法

3、，挑選澎澤鯽360尾，分成3組，每組6個重復，每個重復20尾魚， A組（陰性對照組）僅投喂基礎飼料，B組（陽性中藥對照組）投喂基礎飼料+0.3％的中藥，C組（復方發(fā)酵中藥組）投喂基礎飼料+0.3%的復方發(fā)酵中藥，喂養(yǎng)至61d，測定各組澎澤鯽幼魚生長及免疫各項指標。
　　3將最優(yōu)發(fā)酵條件下制得的復方發(fā)酵中草藥應用到鯉魚飼料中，挑選鯉魚600尾，按照隨機數(shù)字分組的方法分為5個處理，每個處理6個重復，每個重復20尾魚。分別投喂以下飼料,

4、A陰性對照組：投喂基礎飼料;B陽性中藥對照組：投喂基礎飼料+0.3%的中藥;C復方發(fā)酵中藥低劑量組：投喂基礎飼料+0.1%的復方發(fā)酵中藥;D復方發(fā)酵中藥中劑量組：投喂基礎飼料+0.3%的復方發(fā)酵中藥;E復方發(fā)酵中藥高劑量組：投喂基礎飼料+0.5%的復方發(fā)酵中藥，試驗共20d。試驗結(jié)束后測定各組黃河鯉幼魚生長及免疫各項指標。
　　4在植物原料中依次添加0.11%、0.33%、0.55%、0.77%、1.1%、3.3%、5.5%、8.

5、8%的復合中藥作為發(fā)酵基質(zhì)，采用米曲霉、枯草芽孢桿菌、植物乳酸菌、產(chǎn)朊假絲酵母為復合發(fā)酵菌種，測定各組總菌數(shù)、棉酚去除率、硫甙去除率和乳酸含量。確定最適添加量后，采用隨機分組的方法，挑選草魚600尾，分成5組， K組（陰性對照組）：投喂基礎飼料；L組（陽性中藥組1）：投喂發(fā)酵飼料；M組（陽性中藥組2）：投喂發(fā)酵飼料+0.3%中藥；N組投喂發(fā)酵飼料+0.3%單獨發(fā)酵的中藥；P組：投喂發(fā)酵飼料+0.3%和發(fā)酵基料混合發(fā)酵的中藥，喂養(yǎng)至60d

6、，測定各組草魚魚種生長及免疫指標。
　　5、以復方中藥為發(fā)酵基質(zhì)，米曲霉、枯草芽孢桿菌、釀酒酵母和嗜酸乳桿菌作為復合發(fā)酵菌種，以豆粕、麩皮、復方中藥（復方2：大黃100g，板藍根100g。黃芩50g，黃柏50g，金銀花30g，苦參20g。黃芪，40g，當歸，40g，五倍子30g。知母30g。生地400g，玄參，40g，玄明粉40g，甘草15g）1：2：7的比例組成發(fā)酵基質(zhì)。纖維素酶活力和總菌數(shù)為指標，通過單因素試驗和正交試驗的方法

7、，探討多菌種混合復方發(fā)酵中草藥的最佳工藝條件。挑選規(guī)格整齊，無傷病的澎澤鯽720尾，分成治療群和預防群，每群按照隨機數(shù)字分組的方法分為6個處理，每個處理3個重復，每個重復20尾魚。預防群中先投喂基礎飼料或藥餌7天后，按照0.1ml/尾腹腔注射嗜水氣單胞菌感染，治療群先按照0.1ml/尾腹腔注射嗜水氣單胞菌感染，6小時后投喂藥餌或基礎飼料。具體分組為，A陰性對照組：投喂基礎飼料，不感染，注射和試驗組菌液同等劑量的生理鹽水；B陽性中藥組1：

8、腹腔注射0.1ml/尾嗜水氣單胞菌感染（以下同）；C陽性對照組2：投喂基礎飼料+2%的中藥，感染；D復方發(fā)酵中藥低劑量組：投喂基礎飼料+1%的復方發(fā)酵中藥，感染；E復方發(fā)酵中藥中劑量組：投喂基礎飼料+2%的復方發(fā)酵中藥，感染；F復方發(fā)酵中藥高劑量組：投喂基礎飼料+3%的復方發(fā)酵中藥，感染。及時統(tǒng)計死亡數(shù)。
　　結(jié)果1自然 PH值，總接種量10%，米曲霉、枯草芽孢桿菌、產(chǎn)朊假絲酵母、植物乳酸菌接種比例1:2:1:1的條件下，復合菌種

9、固態(tài)復方發(fā)酵中藥的最佳工藝參數(shù)為，發(fā)酵時間84 h，好氧厭氧時間比2:1，初始含水量65%，發(fā)酵溫度為32℃，纖維素酶活力達到42.37 u/g。
　　2飼喂添加量0.3%的復方發(fā)酵中草藥飼料后，澎澤鯽體重增長率提高了33.5%，餌料系數(shù)降低了0.06，復方中藥經(jīng)發(fā)酵后體重增加率相比較未發(fā)酵中藥提高了27.4%，餌料系數(shù)降低了0.07。飼喂60d后，復方發(fā)酵中草藥 SOD、MDA、LSZ、BUN相比較對照組均具有顯著差異（P<0.

10、05)。
　　3飼喂添加量0.3%的復方中藥飼料后，黃河鯉體重增長率提高了5.4%，餌料系數(shù)降低了6.0%，復方中藥經(jīng)發(fā)酵后體重增加率相比較未發(fā)酵中藥提高了11.7%，餌料系數(shù)降低了8.1%；復方發(fā)酵中草藥0.1%組和中藥0.3%組各項指標無顯著差異。復方發(fā)酵中草藥各試驗組均有刺激黃河鯉非特異性免疫，增強抗病能力，促進免疫器官發(fā)育的作用，飼喂20d后，復方發(fā)酵中草藥0.3%和0.5%組SOD、MDA、LSZ、TP、ALB、BUN、

11、脾體指數(shù)相比較對照組均具有顯著差異（P<0.05),復方發(fā)酵中藥在黃河鯉幼魚飼料中的最適添加量為0.3%。
　　4中藥在0.11%～0.77%的濃度范圍內(nèi)，有利于發(fā)酵過程中乳酸含量提高和棉酚、硫甙的降解，在添加量大于3%時，不利于植物原料的微生物發(fā)酵；植物蛋白原料中添加0.3%的復合中藥共同發(fā)酵后，相比較對照組，增重率提高了37.8%，餌料系數(shù)降低了17.2%，LSZ、SOD、SBI均有顯著提高（P<0.05)，而MDA、GOT、

12、GPT、Cr則顯著降低（P<0.05)，說明生物發(fā)酵飼料對草魚魚種具有明顯的促生長及提高非特異性免疫、增強抗病能力的作用；中藥和植物原料單獨發(fā)酵和混合發(fā)酵均對草魚魚種的生長和非特異性免疫能力的提高具有促進作用（P<0.05)，但兩者之間沒有顯著差異（P>0.05)。
　　5固態(tài)復方發(fā)酵中藥（復方2）的最佳工藝參數(shù)為，發(fā)酵時間72 h，初始含水量60%，總接種量9%，纖維素酶活力達到15.02 u/g。飼喂添加量2%中藥的飼料后，預

13、防組澎澤鯽成活率提高了52.5%，治療組提高了35%，相比較等添加量的未發(fā)酵中藥，復方發(fā)酵中藥預防組成活率提高了22.5%，治療組提高了30%，復方發(fā)酵中藥和中藥對嗜水氣單胞菌引起的鯽魚出血病均有明顯的預防和治療作用（P<0.05），且復方發(fā)酵中藥使用的效果優(yōu)于未發(fā)酵中藥。
　　結(jié)論1復方發(fā)酵中草藥（復方1）能顯著提高常見淡水魚鯉魚、鯽魚和草魚的非特異性免疫能力，促進鯉魚、鯽魚和草魚的生長，降低餌料系數(shù),復方發(fā)酵中草藥在飼料中的最